李争光，吴 骏，吴昌平，蒋敬庭，鲁 露，徐 斌，郑 晓

(苏州大学附属第三医院肿瘤中心，江苏 常州 213003)

原发性肝癌在全球范围内发病率居恶性肿瘤第5位，死亡率居第3位，严重威胁着人类的生命健康［1］。我国为肝癌高发区，每年肝癌死亡病例约占全球的50%。肝癌起病隐匿，许多患者就诊时已是晚期，其生存期一般只有3～6个月。经过近几十年的努力，肝癌的诊疗虽然取得了巨大的进步，但其总体疗效仍不令人满意，5 a生存率低于12%。鱼藤素是一种天然的鱼藤酮类化合物，在多种肿瘤细胞和动物模型中均证实具有较强的抗肿瘤及化疗増敏作用，鱼藤素在肝癌中的作用尚未见报道［2-5］。本研究观测鱼藤素对肝癌细胞株SMMC-7721的作用，并初步探索其作用机制，为鱼藤素的进一步研究开发和临床应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 试剂 鱼藤素、二甲亚砜(DMSO)、碘化丙啶(PI)、噻唑蓝(MTT)购自Sigma-Aldrich公司，氟尿嘧啶购自天津金耀有限公司，RPMI-1640培养基购自Gibco公司，胎牛血清购自杭州四季青生物工程有限公司，蛋白提取试剂盒、蛋白定量试剂盒购自南京凯基生物科技发展有限公司，抗总Akt(t-Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、GAPDH一抗购自Santa Cruz公司，辣根过氧化物酶标记的二抗购于北京中杉金桥生物技术有限公司。实验中所用其他常规试剂均为国产分析纯。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 人肝癌细胞株SMMC-7721为本实验室保藏并常规传代培养，生长于含有体积分数10%灭活胎牛血清，青霉素(100 U·mL-1)和链霉素(100 g·L-1)的RPMI-1640培养基中，于37℃、体积分数5%CO2、饱和湿度的培养箱内培养。细胞常规3～4 d传代1次，所有实验采用对数生长期细胞。……