霍志云，童 钦，胡嘉欣，王 炜＊

（1.华威特（北京）生物科技有限公司，北京 100085；2.中国农业科学院特产研究所，吉林 长春 130122）

牛副流感病毒3型（Bovine parainfluenza virus type 3，BPIV3）属于单分子负链 RNA 病毒目（Mononegavirles）副黏病毒科（Paramyxoviridae）副黏病毒亚科（Paramyxovirinae）呼吸道病毒属（Respirovirus）的成员[1]，又称为运输热病毒，是引起牛羊呼吸系统疾病的病毒之一[2]。牛副流感病毒在世界各国普遍存在，呈现不同的流行程度，人及其他动物体内均发现BPIV3的抗体。检测方法主要有病毒中和试验、酶联免疫吸附试验、间接免疫荧光及血凝抑制试验等，其中病毒中和试验是经典的鉴定BPIV3的血清学检测方法，该方法敏感性强、特异性高，具有很高的应用价值，许多新建立的方法必需以该方法作为标准进行比较。鉴于3型牛副流感给肉牛和奶牛产业造成的巨大经济损失，因此对该病应引起足够重视。本试验采用病毒中和试验方法对中国北方部分地区牛场的血清样品进行BPIV3的血清学调查，以掌握牛群中的BPIV3的分布情况，为其防治和净化提供一定的科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 血液样本的采集 自内蒙古、吉林、山西采集血液样本482份，均未免疫接种BPIV3疫苗。

1.1.2 试剂和器材 BPIV3标准株，阴性血清，阳性血清，MDBK细胞，由中国农业科学院特产研究所人兽共患病实验室保存；聚苯乙烯管，单道自动移液器，漩涡振荡器，CO2培养箱，生物安全柜，离心机，水浴锅，灭菌枪头。

1.2 方法

1.2.1 血清收集 采集10mL血液样本离心（1500r／min，15min），收集血清，于－20℃保存。

1.2.2 血清灭活 试验时，将血清至于水浴锅中，56℃灭活30min。

1.2.3 血清稀释 用PBS将血清两倍倍比稀释，从1∶2稀释至1∶4096，每份血清样品做一个重复。……