猪瘟病毒和不同型猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT－PCR检测方法的建立
2012-06-29莫胜兰施开创邹联斌陆文俊
莫胜兰，施开创，胡 杰，邹联斌，陆文俊，李 军
（广西动物疫病预防控制中心，广西 南宁 530001）
猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproduc-tive and respiratory syndrome virus，PRRSV）可以引起以母猪繁殖障碍和各种年龄猪（特别是仔猪）严重的呼吸道疾病为主要特征的猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）。PRRSV可以分为两种基因型，即以VR－2332株为代表的美洲型毒株和以Lelystad virus（LV）为代表的欧洲型毒株，两者之间的全基因组核苷酸序列同源性仅为60%左右。我国于1996年首次分离到PRRSV美洲型经典毒株[1]，2006年分离到以Nsp2蛋白发生第481位氨基酸和第533～561位氨基酸30个氨基酸缺失为标志的高致病性美洲型变异毒株（HP－PRRSV）[2]，2010年分离到致病性PRRSV欧洲型毒株[3]。猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）可以引起各种年龄猪以高热稽留、全身广泛性出血以及母猪繁殖障碍为主要特征的猪瘟（CSF）。CSFV属于单股正链RNA病毒，基因组大约12.3kb，含有一个大的编码3898氨基酸的阅读框（ORF）。CSF和PRRS均为我国一类动物疫病，在我国各地时有发生，并且存在病原隐性感染和持续性感染的现象[4－5]。同时 CSFV 和PRRSV混合感染和继发感染严重[6]，给养猪业造成巨大的经济损失，严重危害我国养猪业的健康发展。目前，已建立了检测CSFV[7－8]、PRRSV[9－10]的单一RT－PCR方法，也建立了检测CSFV 和PRRSV的多重 RT－PCR方法[11－12]，但迄今未见报道能同时检测并区分CSFV以及PRRSV美洲型经典毒株、变异毒株和欧洲型毒株的RT－PCR方法。本研究针对CSFV、PRRSV的基因序列设计3对特异性引物，建立了能同时检测并区分CSFV以及PRRSV美洲型经典毒株、变异毒株和欧洲型毒株的多重RT－PCR方法，为CSFV和PRRSV的快速检测以及流行病学研究提供了有效的技术平台。
