叶成玉，王光华，蔡其刚，王戈平，陆 艳，张芳芳，马利青，周继章＊

（1.青海省畜牧兽医科学院 ，青海 西宁 810016；2.中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室 农业部兽医公共卫生重点开放实验室，甘肃 兰州 730046）

牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV），也称牛病毒性腹泻－黏膜病病毒，与猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）、羊边界病毒（Border disease virus，BDV）同属黄病毒科、瘟病毒属成员，是有囊膜的单股正链RNA病毒，整个基因组大小约为12.5kb，包含有一个大的开放阅读框和两侧的非编码区[1]。开放阅读框编码一个近4000个氨基酸的多聚蛋白（E2的克隆与序列分析），从 N端到C端的顺序为：Npro（p20）、EC（p14）、E0（gp48）、E1（gp25）、E2（gp53）、p7、NS 2－3（p125）、NS 4A（p10）、NS 4B（p32）、NS 5A（p58）、NS 5B（p75），其中 EC、E0、E1和E2为结构蛋白，其他的为非结构蛋白[2]。其编码的结构蛋白主要位于BVDV基因组5′－N端部分。其中E0、E1和E2是糖基化蛋白，而E0、E2为保护性抗原基因，其中结构蛋白E2是牛病毒性腹泻病毒主要的保护性抗原，具有中和表位，能诱导中和性抗体的产生，具有较强的免疫原性，可以用于研究基因工程亚单位疫苗[3]，但E2是BVDV结构蛋白中变异率较高的一种蛋白，抗原逃逸及突变频率较高，是导致疫苗保护失效和牛持续性感染的主要原因[4]。E0是BVDV编码蛋白中保守性很高的蛋白，其上有中和表位，产生的中和抗体具有中和BVDV和丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus，HCV）的能力[5]，因此，它可用于研究基因工程亚单位疫苗及基因工程诊断抗原。目前，国内外针对牦牛源BVDV E0基因的研究报道较少[6]。本研究以青海发病牦牛中分离出的BVDV流行株为试验材料，克隆表达了BVDV QHZK株的E0基因，为进一步研究BVDV E0蛋白的生物学活性，制备基因工程诊断抗原奠定了基础。……