臧莹安，黄彩梅，李婉雁，李 淼，宋 帅，李春玲＊

（1.仲恺农业工程学院动物科学系，广东 广州 510225；2.广东省农业科学院兽医研究所，广东 广州 510640；3.广东省兽医公共卫生公共实验室，广东 广州 510640）

副猪嗜血杆菌（HPS）一般条件下难以分离和培养，尤其是应用抗生素治疗过病猪的病料，因而给副猪嗜血杆菌病的诊断带来困难。与其他检测方法相比，酶联免疫吸附试验（ELISA）具有操作简单、反应速度快、检测结果准确等优点，很适合应用于实践。国内外采用ELISA对HPS进行检测研究的为数不少，但都以全菌研究为主，尚未见有针对副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5（OMP P5）的间接ELISA抗体检测方法。且操作过程中加样作用时间也不尽相同，其中以30、60、120min居多。对酶标二抗反应时间的选择也各有差异，其中以30min和60min为反应时间的较多[1－2]。造成检测操作时间过长，结果不够稳定，差异较大。目前，尚未找到一种理想的ELISA抗体检测方法。

外膜蛋白（outer membrane protein，OMP）是副猪嗜血杆菌的主要毒力因子之一[3]，是革兰阴性菌外膜的主要结构，占其全部组成的一半，在维持外膜结构，保证物质运输，作为大肠菌素、噬菌体受体以及参与F因子结合等方面均有重要的作用。许多致病菌的OMP具有良好的免疫原性，可同时激发机体的体液免疫和细胞免疫，具有异种血清型的免疫交叉保护作用，是一种潜在的共同保护性抗原[4]。研究结果显示，OMP P5蛋白具有丰富的二级结构，其β2转角和无规则卷曲区域可能形成抗原表位。OMP P5蛋白无跨膜区，提示该蛋白可能实现较高量及可溶性的表达。……