张健夫，赵忠伟

(长春大学 特殊教育学院，长春 130022)

酸枣(Zizyphus jujuba var.spinosa)，为广泛分布于我国的一种野生植物资源，主产于河北、陕西、甘肃、辽宁等北方地区［1］。耐干旱、瘠薄，抗寒冷。酸枣根系发达，是良好水土保持树种［2］;而且酸枣花期长、果肉富含Vc、酸枣仁可入药，所以又是上等蜜源植物［4］、经济植物［3］、药用植物［6］，也是集观叶、观花、观果于一身的园林绿化植物。对酸枣的大力开发利用具有重要的经济价值和生态价值。笔者以吉林省柳河县五道沟镇酸枣引种基地中筛选出来的良好酸枣品系为材料，进行初步的组培快繁研究，目的在于找到合适的途径，为大量开发种植酸枣奠定良好基础，对酸枣种质资源保存也有重要意义。

1 试验材料与方法

1.1 试验材料

试验材料选取于吉林省柳河县五道沟镇酸枣引种基地中当年生健壮无病害枝条，于2011年6月19日剪枝并装入有水的桶中带回实验室，将材料在自来水下冲洗5min左右，于超净工作台上将外植体切割成适当大小，放在灭过菌的三角瓶内，先用浓度70%乙醇消毒40s，再用0.1%升汞消毒15min，无菌水冲洗5次后，用无菌滤纸将外植体表面的水分吸干。酸枣枝条消毒后切取带1～2个腋芽大小茎段，垂直接种到培养基上。

1.2 试验方法

(1)外植体诱导:将外植体接种到以1/2MS作基本培养基，附加6-BA(1.0mg/L)、NAA(0.1、0.2、0.4、0.5、1.0mg/L)的五种培养基上进行培养，每2d观察1次，30d后统计诱导率。

(2)分化培养:采用MS培养基，附加6-BA的浓度为0.5、1.0、2.0 mg/L，附加NAA的浓度为0.0、0.1、0.2 mg/L，将诱导出的枝条切分成带2个芽的茎段，垂直接种到7种分化培养基上，每种培养基上均接种30个，每2d观察1次，30d后统计增殖率。

(3)生根培养:将组培苗接种到1/2MS基本培养基，附加NAA(0.5、0.75、1.0mg/L)，进行两种培养条件处理，一是接种后直接进行光培养，二是接种后先暗培养10d后再转到光下培养。每种培养基上均接种30个，30d后统计生根率及平均生根数，筛选出最合适的激素不同质量浓度配比。

(4)不同基质对试管苗移栽的影响:采用三种基质对试管苗进行移栽试验，筛选出有利于试管苗生长，能促进成苗的培养基质。

试验中的基本培养基，附加蔗糖30g/L(生根培养20g/L)、琼脂6.5g/L，pH值6.5，光照强度1000～1200 lx，温度控制在(24±2)℃，光照时间10～12h/d［8］。

2 结果与分析

2.1 诱导培养

将无菌外植体接种到不同的诱导培养基上，8～12d后芽开始萌动生长，16～18d外植体基部有绿色突起出现，30d调查诱导情况。结果见表1。

表1 诱导培养基对外植体诱导率的影响

从表1中可知，1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA1.0mg/L培养基对外植体诱导效果最好，诱导率为93.3%;其次是1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L培养基，诱导率为66.7%。1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L培养基对外植体诱导效果最差，诱导率只有46.7%。

2.2 分化培养

由表2可知，接种在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L培养基上的茎段，经过30 d的培养，增殖系数较高，达到3.5;其次是MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L培养基，增殖系数为2.9。接种在MS+6-BA 0.5mg/L和MS+6-BA 1.0mg/L两种培养基上的茎段，增值系数最低，分别为1.6和1.9。

表2 分化培养基对增殖系数的影响

2.3 生根培养

将经过分化培养的组培苗接种在生根培养基上，生根情况见表3。接种在1/2MS+NAA 0.75mg/L培养基上的组培苗出现根原基早一些，为10～12天;组培苗在其他生根培养基上12～18d出现根原基。接种后先暗培养10d后，再光培养更有利于生根，这与其他树种的无菌苗生根结果一致［10］。由表3可知，接种在1/2MS+NAA 0.75 mg/L培养基上的酸枣组培苗的生根率最高，为96.7%，生根效果好，到30 d时平均根数3.4个，平均根长达到1.8cm，即可进行移栽。

表3 生根培养基对组培苗生根的影响

2.4 不同基质对试管苗移栽的影响

当试管苗长出3～4条新根，即可出瓶移栽。移栽前要先放在自然光下培养3d后打开瓶盖取出试管苗，放在盛有20℃温水的盆中，清洗掉附着在根上的培养基，以免引起污染霉烂。试管苗移栽到3种培养基质中进行试验，栽植深度以试管苗不倒伏为准，栽后喷适量水。移栽后要保持环境温度在20℃～25℃，空气相对湿度在80%～90%，采用塑料膜保湿，10d后揭开塑料膜，用遮光率为50%的遮阳网遮阳，15d后撤掉遮阳网。40d后调查统计，结果见表4。

表4 不同基质对试管苗移栽的影响

由表4可知，3种基质对试管苗移栽成活率无明显差异，但对试管苗生长速度和生长势有很大影响，以河沙+园土+森林腐殖土(2:2:6)的培养基质效果最好，移栽后40天调查，平均苗高达到11.9cm，生长旺盛，能促进成苗。

3 结论

(1)1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA1.0mg/L培养基对外植体诱导效果最好，诱导率为93.3%;接种在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L培养基上的茎段，经过30 d的培养，增殖系数较高，达到3.5，达到继代壮苗同步，保证分化出的芽粗壮，正常生长，实现高增殖率;接种在1/2MS+NAA 0.75 mg/L培养基上的酸枣组培苗的生根率最高，为96.7%，生根效果好，到30 d时平均根长达到1.8cm，平均根数3.4个，接种后先暗培养10d比直接光培养更有利于生根;用河沙+园土+森林腐殖土(2:2:6)作培养基质移栽试管苗效果最好，能促进成苗。

(2)试验的外植体选择当年生枝条，取材方便，不影响产量，材料量大，对酸枣树体没有大的影响。也有研究利用休眠芽做外植体进行组培取得较好效果［12］。外植体消毒后，培养初期会有一定程度的褐化现象，随着继代时间的增加，褐化现象逐渐减轻。如果褐化现象严重，可加入抗氧化剂来防止。

［1］张亚利，李新岗，姜少娟，等，陕西黄土高原酸枣仁品质比较分析［J］，西北林学院学报，2007，22(4):146-148.

［2］内蒙古植物志编辑委员会，内蒙古植物志［M］.呼和浩特:内蒙古人民出版社，1989.

［3］郭廷辅.水土保持经济植物实用开发技术［M］.济南:黄河水利出版社，1995.

［4］侯学煜.中国植被地理及优势植物化学分析［M］.北京:科学出版社，1982.

［5］王宗训.中国资源植物利用手册［M］.北京:中国科学技术出版社，1989.

［6］熊文愈.中国木本药用植物［M］.上海:上海科技教育出版社，1993.

［7］中国医学科学院药用植物资源开发研究所.中国药用植物栽培学［M］.北京:中国农业出版社，1991.

［8］曹孜义，刘国民.实用植物组织培养技术教程［M］.兰州:甘肃科学技术出版社，2002.

［9］曹孜义.现代植物组织培养技术［M］.兰州:甘肃科学技术出版社，2003.

［10］孙清荣，孙洪雁，赵红军.中国樱桃抗病毒选系试管苗生根的研究［J］.园艺学报，2000，27(2):57-58.

［11］Jyothi Prakash Bolar，John L.Norelli，Herb S.Aldoinckle.An efficient method for rooting and acclimation of micro-propagated apple cultivars［J］.HortScience，1998，33(7):1251-1252.

［12］代丽，刘孟军，王玖瑞，等.酸枣组培快繁研究［J］.河北农业大学学报，2005，28(2):19-22.

［13］代丽，王玖瑞，刘孟军，等.酸枣组培快繁的影响因素［J］.河北农业大学学报，2006，29(3):26-28.