成 凤 匡文斌 王 秦 秦晓林 范晓卿 董晋豫 梁勤东 李 朴 涂植光

(重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点试验室，重庆 400016)

IL－12是由单核巨噬细胞、B淋巴细胞等分泌的具有免疫调节活性的细胞因子，由P35和P40两个亚基通过二硫键相连而成，P35、P40任何一个亚基单独存在时没有生物学活性，只有不同基因编码的两个亚基结合成异二聚体才具有生物学作用［1］。IL－12主要参与细胞免疫，能够与NK细胞、T淋巴细胞等协同发挥抗肿瘤效应，也能够通过自身或诱导其它因子如IFN－γ抗肿瘤，在发现的早期就开始临床应用研究，成为肿瘤免疫治疗的研究热点。但是全身应用IL－12毒副作用大，而且半衰期短，制约了其在临床的推广应用。因此，我们拟采用重组腺病毒作为基因治疗的载体，将IL－12基因导入细胞，在细胞内高表达IL－12，发挥抗肿瘤作用。本研究中首先构建携带IL－12双亚基基因的腺病毒载体，观察其对人肝癌细胞Hep3B增殖及转化生长因子(TGF－β)表达的影响，为进一步研究肿瘤免疫治疗奠定基础。

1 材料与方法

1．1 材料 腺病毒穿梭质粒pAdTrack－CMV、骨架质粒pAdEasy－1和大肠杆菌BJ5183由美国芝加哥大学分子肿瘤实验室何通川教授馈赠。人胚肾293细胞、人肝癌细胞Hep3B、大肠杆菌DH5α均由本室保存。LipofectamineTM2000购自Invitrogen公司。高保真酶、限制性内切酶、T4DNA连接酶等均购自TaKaRa公司。质粒提取试剂盒、凝胶回收试剂盒均购自OMEGA公司。鼠抗人IL－12单克隆抗体、鼠抗人β－actin单克隆抗体、HRP标记兔抗鼠二抗均购自Santa Cruz公司。

1．2 细胞培养 AD293、Hep3B在37℃、5%CO2条件下，用含10%FBS的DMEM培养。

1．3 重组腺病毒载……