HPLC法测定超低温粉碎胎盘粉中尿苷的含量
2012-06-18陈军霞潘林梅邱碧菡
卞 凌,陈军霞,潘林梅,邱碧菡,李 欢
紫河车(Placenta Hominis)是健康人体的干燥胎盘经炮制而成的贵重补药,有几百年的药用历史。一般取健康妇女分娩的胎盘做药用原料,味甘、咸,性平偏温,归心、肺、肾经,具有温肾补精、益气养血的功能,用于虚劳羸瘦、骨蒸盗汗、咳嗽气喘、食少气短、阳痿遗精的治疗[1-2]。为了能更好地发挥胎盘的功效,笔者采用超低温冷冻干燥提取技术,使胎盘中的活性物质和营养成分浓缩率提高。胎盘的化学成分复杂,包括次黄嘌呤、尿苷、尿嘧啶等。研究报道这些成分对单胺氧化酶(MAO)均具有不同程度的抑制作用,具有抗衰老的生物活性。尿苷作为胎盘中主要药效成分之一[3-5],含量较高,因此,笔者选择其作为超低温粉碎胎盘粉质量评价的指标,采用HPLC法进行含量测定。
1 仪器与试剂
1.1 仪器 Waters系列高效液相色谱仪(515 HPLC pump,2487 Dual λ Absorbance Detector,N2000工作站);Blenchtop Cleaners HB2060(汉邦科技),MJ-500电子天平(CHYO公司);BP211D电子天平(Sartorius)。
1.2 试剂 尿苷标准品(中国药品生物制品检定所);甲醇为色谱纯;乙醇为分析纯(购自江苏汉邦公司);水为娃哈哈纯净水。新鲜胎盘由南京市妇幼保健院健康产妇提供。
2 方法及结果
2.1 样品制备 新鲜胎盘除去羊膜及脐带,反复冲洗至去净血液,获得新鲜干净的胎盘;放置研钵,加入液氮,迅速冷冻,将冻块压碎,并转移至研钵研磨,边研磨边加液氮,直至成细末;将研磨好的胎盘细末转移至固定容器中,低温干燥得超低温粉碎胎盘粉。
2.2 HPLC法样品测定 样品制备:精密称取低温胎盘粉约1.0 g,置于50mL容量瓶中,加入50%乙醇约40mL,超声30min,放冷至室温,再用50%乙醇定容,用0.45μm有机膜滤过。……
