胡 俊，陈旭辉，吴 军

重组组织型纤溶酶原激活剂（recombinant tissue－type plasminogen activator，rt－PA）是丝氨酸蛋白酶家族的一员，主要作用是激活纤溶酶原转变为纤溶酶。rt－PA对血栓的选择性高，半衰期短，无抗原性；是迄今为止唯一被美国FDA批准用于急性脑梗死的溶栓药物，可溶解血栓，早期开通闭塞的血管，恢复血供，减少脑组织损伤。欧美国家相继开始了rt－PA静脉溶栓治疗急性脑梗死的大规模、多中心、随机对照实验，美国的NINDS、欧洲ECASS等临床实验均证实溶栓治疗有明显疗效［1，2］。但是由于rt－PA静脉溶栓治疗时间窗只有3h，极大地限制了其在临床上的应用。近年有研究表明［3，4］，rt－PA除了参与溶栓过程之外，还可能参与血脑屏障（BBB）后期的血管生成、神经生成和轴突再生。本实验进一步探讨rt－PA对血脑屏障氧糖剥夺后神经细胞的作用。

1 材料与方法

1.1 材料 人脐静脉内皮细胞（HUVEC）、rt－PA、VEGF ELISA、小牛血清、胰蛋白酶、马血清、考马斯亮蓝、甘氨酸、丙烯酰胺、MTT、相差倒置显微镜、振荡器、酶联免疫检测仪、紫外可见分光光度计TU－1810D等。

1.2 方法

1.2.1 HUVEC细胞培养 HUVEC细胞株用含有10%FCS的RPMI－1640培养液，在37℃，5%CO2培养箱培养。细胞贴壁生长，细胞呈菱形。当细胞接近70%～80%融合时以0.25%胰酶＋0.02%EDTA消化液消化后传代。HUVEC细胞浓度取2×105／mL用于各项实验。

1.2.2 海马神经元原代培养 海马神经元取自C57BL／6新生鼠，75%乙醇消毒 ，取出大脑置于冷的Hanks平衡盐溶液中，迅速剥离分出两侧海马组织，转移至0.25%的胰酶中37℃消化15min。血清终止消化，1 500r／min，4℃离心10min以沉降组织。用冷的10%DMEM清洗组织一次，离心后重悬，吹打使组织成单细胞悬液，调整细胞密度为5×104／mL。接种于多聚鸟氨酸处理的培养瓶、24孔板与96孔板中。……