大鼠不同程度创伤性脑损伤后肠黏膜屏障的应激性变化
2012-06-10郎宇璜陈凤媛缪京丰席晨辉
郎宇璜,陈凤媛,缪京丰,席晨辉
创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)是严 重创伤导致死亡的主要原因之一,除原发损伤过于严重导致不可逆脑损伤外,其继发的多器官功能障碍综合征(MODS)也是导致死亡的主要原因。目前,有关TBI后胃肠功能障碍的研究多集中在营养不良和应激性溃疡方面,而对于肠黏膜屏障(intestinal mucosa barrier,IMB)功能的应激性变化研究较少[1]。不同程度TBI后IMB应激反应是如何变化的?本实验通过建立大鼠不同程度TBI模型,研究大鼠不同程度TBI后IMB的应激性变化趋势,报道如下。
材料与方法
1 实验动物分组及处理
健康清洁级雄性Sprague-Dawley大鼠78只,体重200~250g,由复旦大学实验动物科学部提供[SYXK(沪)2007-002]。将大鼠随机分为正常对照组(n=6)、轻度 TBI组(n=24)、中度 TBI组(n=24)、重度TBI组(n=24)。轻、中、重度TBI组根据伤后3、12、24、72h 时相各分为 4 个亚组(T3、T12、T24、T72 时相组),每组 6 只。参照 Feeney’s[2]自由落体硬膜外撞击方法建立轻、中、重度TBI模型[3]。正常对照组及T3、T12、T24、T72时相组大鼠用10%水合氯醛(300mg/kg)腹腔内注射麻醉后,打开腹腔,腹主动脉取血置于抗凝管,无菌技术抽取大鼠门静脉血入无热原抗凝管中,3 000r/min离心5min,分离血浆并冻存于-70℃冰箱,集中检测血浆D-乳酸(D-LAC)、内毒素(ET)水平,二胺氧化酶(DAO)活性。取回肠末段(距回盲部5cm)组织约1cm用10%的中性甲醛液固定,常规脱水,石蜡包埋,切片,苏木精-伊红(HE)染色,封片。光学显微镜(Olympus CS-31)下观察肠黏膜组织形态变化。
2 检测指标及方法
病理评分方法:采用 chiu’s法[4]评分进行回肠黏膜损伤指数(MDI)测定。D-LAC测定方法:采用改良酶联紫外分光光度法检测[5],试剂由上海杰美基因公司提供,结果以mmol/L表示。ET测定方法:采用改良基质偶氮显色鲎试验法测定[6],检测试剂盒由厦门鲎试剂厂提供,结果以Eu/ml表示。……
