李卫萍 李虹伟 顾复生

冠状动脉斑块破裂、糜烂、出血，继发冠状动脉痉挛和血栓形成是急性冠状动脉综合征(acute coronary syndromes，ACS)发生发展的关键环节。随着研究的不断深入，人们发现炎症在不稳定斑块的发生、进展及破裂过程中发挥着重要作用。目前认为炎症反应是动脉粥样硬化的应答性反应，在冠状动脉损伤的早期起保护作用，但当损伤持续存在时应答性反应则可能演变为过度的炎症，并促成斑块的形成和破裂。近年的研究表明，妊娠相关血浆蛋白 A(pregnancy associated plasma protein-A，PAPPA)是预测不稳定斑块的新的标志物，与炎症密切相关，可用于ACS的早期诊断和风险评估［1-3］。我们的前期研究提示，炎症因子C反应蛋白(C-reactive protein，CRP)可在转录水平上呈剂量依赖性诱导人外周血单核细胞(PBMCs)的PAPP-A基因表达，但具体细胞内信号调控途径尚不清楚［4］。核转录因子(nuclear factor-κB，NF-κB)是一种调节基因转录的关键因子，对多个炎症反应相关基因的表达具有调控作用，从而参与细胞黏附、炎细胞趋化和细胞外基质降解等病理过程。本研究旨在进一步探讨NF-κB是否参与CRP对人PBMCs的PAPP-A基因和蛋白表达的调控。

1 材料与方法

1.1 材料

CRP(美国Sigma公司);RPMI1640培养基、胎牛血清、M-MLV反转录酶、RNA酶抑制剂、dNTPs、Oligo(dT)15、琼脂糖(美国Promega公司);Trizol(美国Invitrogen公司)，SYBR Green PCR Master Mix试剂盒(美国ABI公司);DNA Marker(北京天为时代科技有限公司)，PCR引物(北京赛百盛公司);淋巴细胞分离液(中科院血液病研究所)，兔抗人PAPPA抗体(美国 Abcam公司)，膜蛋白提取试剂盒、BCA蛋白浓度测定试剂盒、兔抗β-actin抗体、羊抗兔二抗(北京尚柏生物医学技术有限公司);核蛋白提取试剂盒、NF-κB p65检测试剂盒(美国 Active Motif公司)。……