李 伟，秦红刚，张 萍，漆世华，朱 薇，王 威，谢红玲，温文生，吴玉石

(武汉中博生物股份有限公司，武汉 430070)

昆虫细胞杆状病毒表达系统是20世纪80年代发展起来的新型表达载体系统，据报道现已成功应用于500多种外源蛋白的表达［1］。相比贴壁依附型的哺乳动物细胞，昆虫细胞可直接进行悬浮培养而更具有优越性。不同昆虫细胞系在不同培养基中的生长动力学及代谢参数已有文献报道［2］。理论及实验表明，利用重组杆状病毒感染高密度的Sf9细胞可获得高水平的外源蛋白的表达［3］。本文对Sf9细胞在Sf900Ⅱ无血清培养基和仅添加10%血清的Grace基础培养基中的生长情况进行了比较，同时利用Sf900Ⅱ无血清培养基从摇瓶放大到14 L搅拌式生物反应器对培养工艺做了研究，为昆虫细胞的大规模高密度培养打下基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞 Sf9昆虫细胞由美国 Newport＆Prota tek公司惠赠，经摇瓶悬浮培养驯化所得。

1.1.2 培养基及试剂 Sf900Ⅱ无血清培养基及添加剂PF68、Grace基础培养基均购自Gibco公司;小牛血清购自武汉三利生物技术有限公司;葡萄糖、氨、乳酸、谷氨酰胺及总氨基酸检测试剂盒购自南京建成科技有限公司。

1.1.3 实验设备 细胞培养摇床为上海智诚分析仪器制造有限公司;分光光度计为上海尤尼柯2100可见分光光度计;生物反应器为荷兰Applikon 14L搅拌式生物反应器。

1.2 方法

1.2.1 细胞监测 细胞通过血球计数板来计数，经台盼蓝染色来测定细胞活性。

1.2.2 生化分析 葡萄糖、氨、乳酸、谷氨酰胺及总氨基酸的测定严格按相关试剂盒说明书进行，结果在紫外可见光分光光度计上测得。……