(三峡大学医学院，湖北宜昌443002)

脂溢性角化病(SK)又名老年疣、脂溢性疣及基底细胞乳头瘤，是表皮和真皮结缔组织共同增生构成的良性肿瘤。由于SK临床和组织病理表现与HPV感染引起的病毒疣有众多相似之处，国内外学者开始研究SK与HPV之间的关系，但并没有达成共识［1～6］。本研究的目的是通过检测SK组织中高危型HPV16和18的存在情况，以确定这两型HPV是否与SK发病有关。

1 材料与方法

1.1 材料 收集宜昌市第一人民医院病理科2009～2011年的SK石蜡标本43例份(观察组)，组织来源均为非生殖器部位，其中取自四肢17例、头面部23例、躯干3例;患者年龄为38～78岁，＞50岁者35例。正常皮肤组织标本(对照组)15例份来源于整形美容科，其中取自躯干7例、面部5例、四肢3例;年龄为 20 ～ 45 岁。查阅文献［7，8］设计引物，由上海生工合成。PCR Master Mix，DNA marker;小鼠抗HPV L1单克隆抗体，检测型别为 HPV1、6、11、16、18、31;DyLight549 标记山羊抗小鼠 IgG，DAPI染色液，其他相关试剂均为进口或者分析纯。仪器包括HM340E石蜡切片机、ECLIPSE TE2000-S倒置荧光显微镜、DMR型图像分析系统、MJMini梯度PCR仪、DYCP-31DN型电泳仪、Gel Logic 100凝胶成像系统。

1.2 方法

1.2.1 HPV L1蛋白检测方法 将石蜡组织连续切片，每片4μm;采用免疫组化法检测HPVL1蛋白，按试剂盒说明书进行。设置尖锐湿疣病理标本为阳性对照，荧光显微镜下555 nm激发，出现红色荧光为阳性;将一抗改为PBS的空白对照，无可见红色荧光;正常皮肤组织为阴性对照。

1.2.2 HPV16、18 DNA检测方法 采用 PCR法。采用简单裂解法从组织中提取总 DNA［9～11］。－20℃保存备用。PCR步骤参照文献［7，8］进行。取5μL的PCR反应产物与1μL的溴酚蓝上样缓冲液混匀，2%琼脂糖凝胶电泳。在KODAK凝胶成像仪上扫描，照相。……