蒋 伟，袁远华，廖晓鸿，苏丹萍，贺东生

(华南农业大学兽医学院，广东 广州 510642)

猪圆环病毒(Porcine circovirus，PCV)，无囊膜，直径约17 nm，是最小的动物病毒之一。PCV2感染以断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)最为常见。主要感染7周龄～15周龄仔猪，仅有一例感染3周龄新生仔猪的报道[1]，临床症状表现为消瘦、呼吸困难、腹泻、可视黏膜苍白，也会伴发皮炎，剖检可见淋巴结肿胀，肾损伤，死亡率较高[2]。

PCV2基因组为一个单链环状DNA，全长为1768 bp或1767 bp。有3个主要的开放阅读框(ORF)，ORF1最大，编码病毒的复制蛋白；ORF2是PCV2的重要抗原基因，编码病毒主要结构蛋白(Cap蛋白)，与宿主免疫有关，是构建重组疫苗和建立检测方法的首选基因。近年来ORF3基因成为PCV2疫苗研究的热点，Anbu等对天然宿主猪接种了缺失ORF3基因的PCV2，结果表明该变异病毒株会导致温和的并且不出现病理损伤的病毒血症[3]。此研究提示ORF3基因在PCV2对宿主致病性方面的重要作用。

疫苗接种是预防和控制圆环病毒病最有效的办法，本实验将PCV2的抗原表位串联并在大肠杆菌表达，为PCV2基因工程亚单位苗研究奠定基础。

1 材料和方法

1.1 主要实验材料 pMD18-T载体、T4 DNA连接酶、限制性内切酶、IPTG、TaqDNA聚合酶、DNA Marker、DNA片段纯化试剂盒、感受态细胞BL21(DE3)均购自宝生物工程(大连)有限公司；原核表达载体pET32a(+)和兔抗PCV2阳性血清由本实验室保存；蛋白纯化试剂盒6×His-Tagged Protein Purification KitNi-Agarose His购自北京康为世纪生物科技有限公司；PCV2 ELISA试剂盒购自武汉科前动物生物制品有限公司；辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗兔IgG购自广州展晨生物科技有限公司。

1.2 重组表达质粒的构……