吾鲁木汗·那孜尔别克，张宇凤，龚凤娟，恩特马克·布拉提白

(吉首大学生物资源与环境科学学院，湖南 吉首 416000)

禽霍乱是一种主要由血清型A:1、A:3或A:4多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)引起的家禽和野生鸟类的接触性传染病，给养禽业造成严重的经济损失[1]。目前，预防禽霍乱的主要措施是接种禽P.multocida的灭活苗和活菌苗。研究表明，强毒株制备的灭活苗只对同源菌株的感染具有保护作用，而弱毒株制备的活菌苗虽对同源菌株和异源菌株的感染具有一定的交叉保护作用，但存在毒力返强的缺点。因此，研究禽P.multocida致病因子及其致病机理，对研制安全有效的活菌苗极为重要。

研究表明细菌荚膜是致病菌的主要毒力因子[2]。Pruimboom等的研究表明荚膜透明质酸是禽P.multocida的粘附因子[3]。Chung等的研究表明禽P.multocidaX-73株荚膜基因位点由荚膜多糖输出蛋白基因hexABCD、荚膜多糖合成酶基因hyaABCDE和荚膜多糖修饰酶基因phyAB等11个开放阅读框组成，而hexA基因的缺失突变导致禽P.multocidaX-73株对小鼠或鸡的毒力减弱[4-5]。本实验以禽P.multocida C48-3株为研究对象，采用基因敲除技术构建了hexABC基因缺失突变株，通过小鼠致病性试验检验荚膜缺陷对禽P.multocida毒力的影响，为进一步开展禽P.multocida致病机理的研究奠定基础。

1 材料和方法

1.1 菌株、质粒及实验动物 血清型A∶1禽P.multocidaC48-3株(CVCC458)购自中国兽医微生物菌种保藏管理中心；大肠杆菌DH5α、pBR322和pMD18-T载体购自TaKaRa公司；多功能低拷贝质粒pWSK29[6]由军事医学科学院微生物流行病研究所秦鄂德教授惠赠；5周龄雌性清洁级昆明系小鼠购自中南大学湘雅医学院实验动物学部。……