陶绍能，周建国，程光华，杨继文，葛俊亮

(皖南医学院附属弋矶山医院 核医学科，安徽 芜湖 241001)

氧稳态的维持是细胞生命活动的基本前提，二氯化钴常应用于体外模拟细胞低氧环境，这与二价钴离子可诱导细胞中低氧诱导因子-1(hypoxia induced factor，HIF-1)及其调控基因的表达有关。HIF-1的活性主要由HIF-1α的活性所决定，是最重要的低氧信号转录调节因子［1］。在实体瘤的发展过程中，由于存在血管功能受损和血供障碍的问题，因此缺氧是无法回避的问题，缺氧的严重程度决定了肿瘤细胞是适应环境还是走向凋亡［2］。激活的HIF-1α可以影响下游基因的表达，从而影响肿瘤细胞的增殖。本研究从二氯化钴所致的缺氧诱导肺腺癌A549细胞凋亡和增殖的角度，初步探讨HIF-1α在缺氧环境下的表达及其与细胞凋亡和增殖的关系。

1 材料和方法

1. 1 材料与试剂 肺腺癌A549细胞株培养于RPMI 1640中，37℃、5%CO2孵箱中培养，取对数生长期细胞实验。新生牛血清(GIBCO，USA);RPMI 1640培养基(GIBCO，USA);CoCl2(上海生物工程技术服务有限公司)，DMS0(Amresco)，四甲基偶氮唑盐(MTT，Amresco)，Annexin V-FITC/PI双标记染色试剂盒(晶美公司)，二氧化碳恒温培养箱(英国Galaxy)，RT-PCR 试剂盒(invotrigen)，RT-PCR 仪(美国 BIO-RAD Mycycler)，凝胶成像系统为国产Tanon天能。美国BD FACSCantoII流式细胞仪。

1.2 细胞培养和传代 A549细胞于37℃、5%CO2混合气体和饱和湿度的培养箱中进行培养，生长培养基为 RPMI 1640完全培养基，含10%热灭活(56℃，30 min)的小牛血清、青霉素100 U、链霉素100 U，待细胞生长呈单层铺满瓶底时，用0.25%的胰蛋白酶和0.02%EDTA为1∶1的混合消化液消化传代。

1.3 细胞体外乏氧微环境的建立 将适量化学乏氧剂CoCl2溶于新鲜三蒸水，配制两种浓度的工作液，分别适用于96孔培养板和75 cm2培养瓶，分装入小玻瓶，高压蒸气灭菌，4℃冰箱保存。……