周 珏，卢林明，张根葆

(皖南医学院 1.病理解剖学教研室;2.病理生理学教研室;3.蛇毒研究所，安徽 芜湖 241002)

蛇毒具有广泛的生物学活性，是一种天然的药用资源［1－2］。蝮蛇是我国分布最广、数量最多的一种毒蛇，蝮蛇蛇毒含有多种抗凝、抗血栓及抗肿瘤的活性成分，由于蝮蛇生长环境的不同，不同地域的蝮蛇蛇毒各组分及作用也不尽相同，本校蛇毒研究所通过改良蛇毒分离纯化技术，从皖南产蝮蛇蛇毒中提取了一种抑瘤组分Ⅰ(Agkistrodon Halysvenom antitumor component-Ⅰ，AHVAC-Ⅰ)。前期研究已证实具有高效低毒的抗凝、溶栓作用，其机制可能与影响血管内皮细胞有关。为进一步了解对肿瘤的影响，本实验以人胃癌细胞株SGC-7901为对象，观察AHVAC-Ⅰ对其生长增殖的影响并探讨其可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 试剂及药品 AHVAC-Ⅰ干冻粉由皖南医学院蛇毒研究所提供。RPMI1640细胞培养液(美国Hyclone);胎牛血清(杭州四季青公司);青霉素-链霉素溶液、胰酶消化液、CCK-8试剂盒、TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(碧云天生物技术公司)。

1.2 细胞培养 人胃癌细胞株SGC-7901，购自南京凯基生物技术发展有限公司(货号:KG026)。细胞株常规培养，胰酶消化1∶2传代，培养于含10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素溶液的RPMI1640中，置于5%CO2、37℃的培养箱中孵育，每隔1～2 d换液、传代，至对数增长期，收集细胞实验。

1.3 CCK-8比色法 取对数增长期的细胞，调整细胞浓度(1×104/孔)接种于96孔培养板中，5%CO2、37℃培养箱中过夜，将AHVAC-Ⅰ干冻粉溶解于培养液中，稀释、配制成各浓度AHVAC-Ⅰ(0.1、0.3、1、3、10、30、100、300 μg/ml)，设空白组、阴性对照组及阳性对照组(50μg/ml 5-Fu)，每组设4复孔;培养箱孵育24 h，每孔加20μl CCK-8溶液，孵育2 h后……