刘 靓,娄 忻,张 莉,关亚鹏

(华北制药集团新药研究开发有限责任公司 微生物药物国家工程研究中心，河北 石家庄 050015)

近年来，棘白霉素类抗真菌药发展迅猛，已有卡泊芬净、米卡芬净、阿尼芬净等多个广谱、低毒、高效的新化合物进入了临床研究[1～3]。FR901379为棘白霉素类化合物米卡芬净的前体物质，在合成米卡芬净时需要将其通过脱酰基酶作用脱去酰基后连接其它侧链。

均匀设计的数学原理是数论中的一致分布理论，着重在实验范围内考虑实验点均匀散布以求通过最少的实验来获得最多的信息，因而其实验次数比正交设计明显减少，特别适合于多因素多水平的实验[4，5]。

作者对棘白霉素类化合物脱酰基酶产生菌ZH-020的转化工艺进行研究，确定了最佳转化条件，并通过均匀设计实验优化了其发酵培养基的配方。

1 实验

1.1 菌种

供试菌株为ZH-020。

1.2 培养基

斜面培养基：葡萄糖，酵母粉，麦芽粉，FeSO4·7H2O，ZnSO4，MnCl2，琼脂，蒸馏水配制，pH值7.2。

种子培养基：糊精，蔗糖，酵母粉，磷酸氢二钾，玉米浆，FeSO4·7H2O，蒸馏水配制，pH值7.4。

发酵培养基：花生饼粉，葡萄糖，蔗糖，磷酸二氢钾，无水硫酸镁。

1.3 摇瓶培养

单菌落转接于斜面上，待长出丰满孢子后接入种子培养基中，置于30 ℃、220 r·min-1的摇床培养48 h左右；然后按3%接种量接入发酵培养基中，置于30 ℃、220 r·min-1的摇床培养96 h左右。加入底物，转化一段时间后，采用HPLC法测定最终发酵效价(μg·mL-1),依下式计算转化率：

1.4 转化条件实验

以ZH-020为出发菌株，分别在25 ℃和30 ℃的条件下，向发酵液中加入不同浓度(1000 mg·L-1、1200 mg·L-1、1400 mg·L-1)的底物FR901379，并改变转化时间(20 h、24 h、28 h)，进行转化条件实验，确定最佳转化条件。……