刘 涛，李占林，王 宇，田 黎，裴月湖，华会明

(1.中国医科大学药学院，辽宁 沈阳 110001；2.沈阳药科大学 创新药物研究与设计教育部重点实验室，辽宁 沈阳 110016；3.国家海洋局第一海洋研究所，山东 青岛 266061；4.青岛科技大学，山东 青岛 266042)

自20世纪70年代以来，海洋微生物作为一种新药筛选资源，因其代谢产物结构独特、活性显著、易于工业化操作等优势而倍受关注[1]，尤其是在抗肿瘤药物领域有着巨大潜力[2]。

为了寻找新的抗肿瘤活性成分，作者对海洋来源真菌Hypocreavirens的菌丝体进行了化学成分研究，共分离得到8个化合物，并对其结构进行了鉴定。

1 实验

1.1 菌株

实验菌株于2007年12月采自广西沙田潮间带正红树(Rhizophoraapiculata)。由国家海洋局第一海洋研究所、青岛科技大学田黎教授鉴定为真菌Hypocreavirens。菌株保存编号：HTTA-Z07723，存放于科技部资助的国家海洋局第一海洋研究所药用海洋微生物菌种资源库。

1.2 试剂与仪器

实验所用试剂为分析纯或色谱纯。

开放ODS柱色谱填料(100 μm),日本YMC公司；Sephadex LH-20，GE healthcare；柱色谱硅胶(200～300目)及薄层色谱硅胶，青岛海洋化工厂；Bruker ARX-300型和AV-600型核磁共振仪；L2130型HPLC(检测器为L2400型)，日本HITACHI公司；YMC-Pack ODS-AM:10 mm×250 mm。

1.3 培养基

发酵培养基：燕麦浸汁200 mL，蛋白胨3 g，酵母粉2 g，葡萄糖12 g，NaCl 15 g，MgCl2· 6H2O 1.0 g，KCl 0.1 g，FePO40.01 g，水1000 mL。

1.4 提取分离

取菌株接种于发酵培养基，于25℃、15 r·min-1振荡培养16 d，发酵量60 L。

发酵液经过滤得菌丝体243 g(干重)。菌丝体经反复“冷冻-融化”处理后，用4 BV丙酮提取3次，每次1 h，合并提取液，减压回收溶剂得浸膏97 g。

菌丝体丙酮提取物经硅胶柱色谱，用氯仿-甲醇(100∶0～0∶100)进行梯度洗脱，得到219个流分(每流分800 mL)。

第5流分经重结晶得到化合物Ⅲ(5 mg)；第4～11流分合并，经硅胶柱色谱，用石油醚-丙酮(40∶1～0∶100)进行梯度洗脱。……