曹龙凯，郭春华

（西南民族大学生命科学与与技术学院，动物遗传育种国家民委-教育部重点试验室，成都 610041）

随着分子生物学的发展，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术已经成为检测不同样品间基因表达水平定量差异的权威性方法，但是也出现了许多缺陷，包括试验设计不合理、对照和重复缺乏、分析方法和报告形式多样、RNA样品质量、引物和探针低劣选择等。实时荧光定量PCR试验出版物所需最小信息量（MIQE）是一套国际新推出的指导方针，对RT-qPCR的试验和发表文章所必需的信息提出了最低限度的标准[1]。MIQE与蛋白质组学试验、基因组序列、RNA干扰、代谢研究和NDA微阵列分析的国际标准一样，作为RT-qPCR的国际标准——MIEQ也被收入MIBBI[2-8]。MIQE对RT-qPCR的过程做了详尽的阐述，从而使科学工作者能获得一致的、高质量的RT-qPCR试验数据。按照这一标准，可以规范试验操作，提高研究者对试验结果的可信度，增强试验的透明度，促进试验室之间的一致性，进一步规范qPCR的仪器和试剂的研发生产[9-12]。

MIQE所提供的检测列表包含85个参数，满足了所有杂志的评审标准，确保了试验结果的质量，应对mRNA转录的高动态性和样品操作及下游处理步骤的多变性，使通过该标准评估的试验结果具有一致性、可靠性和可比性[1]。另外，还规范了RT-qPCR的专用术语，以统一实时定量PCR的试验数据[13]。

根据MIQE指南，一个典型的RT-qPCR试验流程包括试验设计、RNA提取、引物和探针设计、RT-PCR、数据分析、对照组、重复数。从试验条件到样品操作，都要进行精心的安排。本文介绍了一套标准化的RT-qPCR的试验方法，为RT-qPCR试验提供参考。……