朱忆凌

[摘要] 目的 探讨膀胱移行细胞癌组织（BTCC）中XIAP的表达及其与患者临床病理特征的关系。 方法 免疫组化Envision二步法检测60例BTCC标本中XIAP的表达，并探讨其与患者临床病理特征的关系。另选择同期30例正常的膀胱黏膜组织标本作为对照。 结果 BTCC组织标本中XIAP的阳性表达率明显高于正常膀胱黏膜组织（χ2=31.42，P < 0.01）。BTCC组织中XIAP的表达与肿瘤数量、是否转移、病理分级和临床分期等临床病理特征均无明显的相关性（P > 0.05），而与肿瘤是否复发密切相关（P < 0.05）。 结论 XIAP基因与BTCC的发生和发展密切有关，作为判断BTCC的术后复发和评估预后的独立指标，有望成为BTCC基因诊疗的新靶点。

[关键词] 膀胱移行细胞癌；免疫组化；XIAP；临床病理特征

[中图分类号] R737.14[文献标识码] B[文章编号] 1673-9701（2012）32-0081-02

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，近年来发病率呈上升趋势，到目前为止其发病机制尚未完全阐明。近年来已证实肿瘤的发生、发展、转移和预后与肿瘤细胞的凋亡功能紊乱有密切关系[1]。XIAP是近年来新发现的一种凋亡抑制基因家族分子，在成人许多肿瘤组织或胚胎组织中高表达，而在正常组织中无明显表达或表达较弱[2]。有关XIAP的抗肿瘤细胞凋亡的特性及其在肿瘤发生、发展、转移和预后中的作用越来越引起医学工作者的重视[3]。本研究初步探讨了XIAP蛋白在膀胱移行细胞癌（BTCC）组织中表达及其与患者临床病理特征的关系。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源

选择我院病理科2006年1月～2012年4月收集的BTCC患者的手术标本共60例，其中男48例，女12例；年龄31～87岁，平均（59.4±6.1）岁，所有患者术前均未行放疗或化疗。另选择同期在我院行开放手术时切除的正常膀胱黏膜标本30例作为对照组。

1.2 免疫组化染色

采用免疫组化Envision二步法。石蜡切片常规脱蜡至水，3%H202室温孵育15min阻断内源性过氧化物酶，0.05%胰酶37°C消化15 min，正常血清封闭10 min，滴加1∶100稀释的浓缩型XIAP一抗室温孵育2 h，滴加二抗工作液37°C孵育30 min。各步骤间用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗。DAB显色，苏木素复染，梯度酒精脱水、透明、封片和镜检。以已知阳性的乳腺癌组织切片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。浓缩型XIAP兔抗人单克隆抗体和Envision免疫组化试剂盒均购自北京中山生物制品有限公司，按试剂盒中所附的操作步骤进行实验。

1.3 结果判定

XIAP阳性染色定位于细胞质，呈棕黄色颗粒，多为弥漫性分布，部分患者胞核轻度染色。根据高倍镜视野下计数细胞的染色强度进行计分，其中无色计0分、浅色计1分、棕黄色计2分，褐色计3分；同时再根据计数细胞中阳性细胞所占比例进行计分，其中阴性计0分，阳性细胞比例≤10%计1分，阳性细胞比例11%～50%计2分，阳性细胞比例51%～75%计3分，阳性细胞比例>75%计4分。计算计数细胞染色强度计分和阳性细胞比例计分的乘积≥2分即为XIAP表达（+）。

1.4 统计学处理

应用SPSS 13.0统计学软件进行分析，采用χ2检验。

2 结果

2.1 BTCC和正常膀胱黏膜标本中XIAP表达水平的比较

60例BTCC患者组织标本中37例（61.67%）XIAP表达阳性。30例正常膀胱黏膜标本XIAP表达均阴性。BTCC组织标本中XIAP的阳性表达率明显高于正常膀胱黏膜标本（χ2=31.42，P < 0.01）。见图1、2。

2.2 BTCC组织中XIAP的表达与患者临床病理特征的关系

BTCC组织中XIAP的表达与肿瘤数量、是否转移、病理分级和临床分期等临床病理特征均无明显的相关性（P >0.05），而与肿瘤是否复发密切相关（P < 0.05）。见表1。

3 讨论

肿瘤细胞的增殖和凋亡的平衡失调是引起肿瘤形成和发展的主要机制，凋亡蛋白抑制物（IAP）家族是一种具有广泛表达细胞凋亡抑制物基因的家族，该基因家族成员均具有强大抑制细胞凋亡的功能。XIAP是近年来新发现的IAP家族的成员，在肿瘤细胞凋亡调控中起着重要作用。XIAP基因定位于Xq25，编码分子量为55000，主要通过与caspase-3、caspase-7和caspase-9直接结合，抑制Caspase活性，从而对肿瘤细胞凋亡产生抑制作用，促进肿瘤的形成和发展，是目前已知最强的内源性caspase抑制性基因[4]。XIAP几乎于成人许多肿瘤组织和胚胎组织中均高表达，对肿瘤的形成、发展、恶变和转移均发挥着重要作用[5，6]。

近年来XIAP基因在膀胱癌的形成、发展、恶性转化和预后中的作用越来越引起人们的重视。宋涛等[7]研究发现60例BTCC组织中XIAP蛋白阳性表达率65.0%，正常膀胱黏膜组织均阴性。表明XIAP在BTCC的发生发展中起重要作用，可作为BTCC早期诊断和治疗的标记物。同时研究发现BTCC中XIAP的表达率和表达程度与癌细胞的病理分级和临床分期无明显关系；复发患者XIAP蛋白阳性表达率（90.5%）明显高于原发性（51.3%），XIAP蛋白可用于膀胱癌术后复发预测、预后评估的指标。董雪成等[8]研究发现XIAP在BTCC的发生、发展、恶变和转移中发挥重要作用，XIAP可作为BTCC临床靶向治疗的新靶点。本研究结果发现BTCC标本中XIAP的阳性率明显高于正常膀胱黏膜标本，表明BTCC组织中XIAP表达上调与膀胱癌的发生、发展和恶性转化密切相关，抑制癌细胞的凋亡，促进膀胱癌的发生和发展。推测XIAP基因可能通过与caspase-3、caspase-7和caspase-9的直接结合，抑制caspase家族的活化，从而调控癌细胞凋亡，抑制癌细胞的凋亡，导致癌细胞增生和繁殖，延长癌细胞的生存期，增加癌细胞的基因突变率，参与BTCC的发生、发展和转移过程[9，10]。同时研究发现BTCC组织中XIAP的表达与肿瘤数量、是否转移、病理分级及临床分期等临床病理特征无明显的相关性，但BTCC的复发患者的XIAP的阳性表达率明显高于初发的患者。表明XIAP的表达程度可作为判断BTCC的术后复发和评估预后的独立指标。

总之，XIAP基因与BTCC的发生和发展密切有关，作为判断BTCC的术后复发和评估预后的独立指标，有望成为BTCC基因诊疗的新靶点。

[参考文献]

[1]Yang L，Cao Z，Yan H，et al. Coexistence of high levels of apoptotic sign aling and inhibitor of apoptosis proteins in hum an tumor cells： implication for cancer specific therapy[J]. Cancer Res，2003，63（20）：6815-6824.

[2]Holcik M，Korneluk RG. XIAP，the guardian angel[J]. Nat Rev Mol Cell Biol，2001，2（7）：550-556.

[3]汪良，曾甫清，郑丽端，等. 膀胱癌组织中XIAP染色体连接的凋亡抑制蛋白表达及其对化疗敏感性的影响[J]. 中华泌尿外科杂志，2006， 27（10）：679-682.

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[5]Holcik M，Gibson H，Korneluk RG. XIAP：apoptotic brake and promising therapeutic target[J]. Apoptosis，2001，6（4）：253-261.

[6]菅志远，李宜雄，李小刚，等. XIAP在胰腺癌组织中的表达及其意义[J].中国普通外科杂志，2005，14（5）：385-387.

[7]宋涛，洪宝发，高江平，等. 凋亡抑制基因XIAP在膀胱移行细胞癌中的表达[J]. 新乡医学院学报，2007，24（4）：357-359.

[8]董雪成，李庆文. X连锁凋亡抑制蛋白在膀胱癌的表达及其意义[J]. 蚌埠医学院学报，2009，34（3）：229-231.

[9]Bilim V，Kasahara T， HaraN， et al. Role of XIAP in themalignant phenotype of transitional cell cancer（TCC） and therapeutic activity of XIAP an tisense oligonucleotides against multidrug-resist ant TCC in vitro[J]. Int J Cancer，2003，103（1）：29-37.

[10]寇有为，王强. XIAP、caspase- 3在胃癌中表达及其相关性[J]. 中国现代医学杂志，2011， 21（28）：3490-3494.

（收稿日期：2012-06-18）