赵 晖 王义周 寇 爽 李 明 齐 放 张秋霞 王 蕾*

(1.首都医科大学中医药学院中药学系，北京 100069;2.首都医科大学中医药学院中医学系，北京 100069;3.泰和诚医疗集团医学部，北京 100013)

多发性硬化(multiple sclerosis，MS)是一种中枢神经系统(central nervous system，CNS)自身免疫反应介导的炎性神经退行性病变［1］。Vogt J等［2］研究发现，MS的主要病理特征是免疫炎性反应引起的脱髓鞘和轴突损伤等，特别是在MS早期就发生的轴突变性及神经元损伤是MS患者神经功能障碍的重要原因。实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)是研究MS公认的动物模型［3］。选择碱性髓鞘蛋白(myelin basic protein，MBP)68－86及 MBP87－99均能引起 EAE。本课题组前期的实验［4-6］也证实2种肽段MBP能够引起大鼠EAE。本研究内容则是进一步观察 MBP68－86及 MBP87－99在免疫诱导的EAE大鼠模型中APP及GAP-43 mRNA表达及其cAMP-PKA的变化，深入探讨EAE大鼠发病过程中轴突损伤、修复及其可能的分子机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF级雌性Lewis大鼠，体质量150～180 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，实验动物许可证号为SCXK(京)2006－0009。动物饲养在首都医科大学实验动物部，实验动物许可证号:SYXK(京)2005－0022，所有实验均经首都医科大学伦理委员会批准。

1.2 实验药品和试剂

不完全福氏佐剂(incomplete freund's adjuvant，IFA)和结核分支杆菌病(mycobacterium tubercusis，H37Ra，MTB)由美国Difco公司生产。豚鼠MBP68－86(YGSLPQKSQRSQDENPV)，HPLC＞95%，由北京中科亚光生物科技有限公司合成。CAMP酶免试剂盒由美国Assay Designs公司生产。实时荧光定量RTPCR相关试剂由美国Takara及Invitrogen公司提供，引物由上海生工生物有限公司合成。DEPC H2O、Trizol试剂，由 Invitrogen公司提供。Fermentas K1622 RT逆转录试剂盒购自MBI公司。SYBR Green PCR Master Mix试剂盒购自美国应用生物公司。

1.3 EAE模型的诱导

将大鼠按数字表法随机分成5组，正常组(n=10)、大剂量 MBP68－86模型组(n=17)、中剂量 MBP68－86模型组、小剂量 MBP68－86组模型组(n=17)和 MBP87－99组(n=13)。……