蔡永明 张春云 申文晋 李 铭 姜 凌 张宗鹏*

(1.天津药物研究院天津市新药安全评价研究中心，天津 300301;2.天津中医药大学研究生院药物分析学专业，天津 300193;3.天津药物研究院释药技术与药代动力学国家重点实验室，天津 300193)

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(recombi-nant human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor，rhGM-CSF)作用于造血祖细胞，促进其增生和分化［1］，增强单核细胞抗原递呈能力［2］，提高粒细胞和单核细胞抗体依赖细胞的细胞毒［3］。rhGM-CSF临床用于治疗肿瘤病人因放射治疗或化学治疗引起的白细胞减少症［4］;单独或与抗真菌药联合使用可增强抗菌作用［5］;具有提高免疫、抗炎和促进创面愈合功能［6-7］。rhGM-CSF栓经阴道局部给药，拟治疗宫颈糜烂。为非临床安全性评价的确切性提供依据，本课题组进行了大鼠和Beagle犬的免疫原性试验。

1 材料和方法

1.1 试验药物

重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子栓，长春金赛药业股份有限公司提供。规格:①1.5 g/栓(药物含量分别为0、0.87、3.46 和13.84 mg/g)，批号20060401，用于大鼠给药;②8.0 g/栓(药物含量分别为0、0.7、2.8和11.2 mg/g)，批号:20060510，用于 Beagle犬给药。4℃保存。

1.2 检测抗rhGM-CSF抗体的试剂

包被抗原为rhGM-CSF(HPLC纯度:99.4%，浓度:1 mg/mL，批号:CG20050901)长春金赛药业股份责任公司提供。大鼠免疫球蛋白(immunoglobulin G，IgG)和犬IgG由军事医学科学院微生物流行病研究所提供。辣根过氧化物酶标记的羊抗大鼠IgG，美国SBA公司产品;辣根过氧化物酶标记的羊抗犬IgG，美国Rockland Immunochemicals公司产品。酶反应底物3，3'，5，5'-四甲基联苯胺(3，3'，5，5'-tetramethylbenzidine，TMB)和噻唑蓝(MTT)为Sigma产品。TF-1(人红白血病细胞)由中国药品生物制品检定所提供。RPMI 1640培养液为美国Gibco产品。96孔酶标板和细胞培养板，均为美国Costar产品。……