殷爱红 武文琦 崔世军 滕 旭 郑少鹏*

(1.首都医科大学医学实验与测试中心，北京 100069;2.首都医科大学宣武医院胸心血管外科，北京 100053;3.首都医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系，北京 100069)

下肢缺血性疾病(ischemic lower limb)常见于下肢动脉硬化闭塞症、糖尿病动脉硬化闭塞症、下肢血栓闭塞性脉管炎等疾病，是一种严重危害人体健康、降低患者生活质量的疾病，具有较高的病死率。传统的治疗手段包括药物治疗、人工血管、自体血管搭桥和介入治疗;对于严重的慢性肢体缺血患者，上述治疗方法均有局限性［1-2］。Isner J M 等［3］首先采用血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)基因治疗肢体缺血性疾病并获得成功［3］，为缺血性疾病的治疗提出了新方法。

缺血性疾病的治疗性血管生成是心血管及肢体缺血性疾病的研究热点，其中应用基因治疗的方法，促进血管新生，建立侧支循环，从而改善病变部位缺血状况以达到治疗的目的［4］。本研究采用含低氧反应元件的真核表达载体，诱导VEGF的表达对肢体缺血性疾病进行基因治疗，探索适合缺血性疾病基因治疗的载体。

1 材料和方法

1.1 材料

质粒pcDNA3.1由美国乔治敦大学Pedro A.Jose惠赠;缺氧诱导真核表达载体6HRE-pcDNA3.1-h VEGF165由本室构建，其含有人VEGF的低氧反应元件(hypoxia responsive element，HRE)，经体外细胞实验［5］证实此载体在低氧条件下可使VEGF的表达增强。质粒大量提取试剂盒(Plasmid Mega Kit)为德国Qiagen公司的产品。实验动物为新西兰白家兔40只，雌雄不限，平均体质量3 kg。动物许可证号:(2000)第017号。

1.2 方法

1.2.1 质粒DNA的制备

将质粒pcDNA3.1和缺氧诱……