郑 晖 许绍发 贾鸿彦 古淑香

1.首都医科大学附属北京胸科医院麻醉科，北京 101149;2.首都医科大学附属北京胸科医院胸外科，北京 101149;3.首都医科大学附属北京胸科医院结核病分子生物学实验室，北京 101149)

急性肺损伤(acute lung injury，ALI)由于发病机制尚不完全明确，同时缺乏有效的治疗手段，发病率和病死率仍居高不下。研究［1］显示其发病基础与Toll－样受体(Toll-like receptors，TLRs)介导的炎性反应有关。胆碱能抗炎通路(cholinergic anti-inflammatory pathway，CAP)是新近学者发现的一条神经－免疫调节通路［2］，它通过迷走神经及其递质乙酰胆碱与免疫系统相互作用，参与抗炎作用。动物实验研究结果［3］已经证实，CAP可以抑制脂多糖诱导的肿瘤坏死因子的产生和释放，但其确切的作用靶点是否与TLRs有关目前未见报道。本研究拟采用电刺激迷走神经和静脉注射胆碱酯酶抑制剂他克林的方法激活CAP，观察其对内毒素复合油酸2次打击致大鼠急性肺损伤的影响，并验证其可能的作用机制。

1 材料和方法

1.1 仪器与试剂

PCR扩增仪 (美国Bio-Rad公司)，凝胶成像分析系统(美国Bio-Rad公司)，全自动血气分析仪(瑞士AVL公司)，450 nm酶标仪(美国Bio-Rad公司)，动物呼吸机(HX-200，成都泰盟科技有限公司)，脂多糖(美国SIGMA公司)，油酸(分析纯)(北京金龙科技有限公司)，大鼠IL-6 ELISA试剂盒(美国 MARKET公司)，羊抗 NF-κBp65单抗(武汉博士德生物工程公司)，大鼠IgG免疫印迹增强化学发光法试剂盒(武汉博士德生物工程公司)，髓过氧化物酶测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)，PCR引物(北京赛百盛生物公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 动物分组与处理

24只清洁级雄性Wistar大鼠(北京市结核病胸部肿瘤研究所动物实验室提供，SCXK:京2005－0004)，体质量250±20g。……