潘太健 ，马 瑞 ，曹春来 ，彭 韪 ，孙万邦 ，肖拥军

(1.珠海联邦制药股份有限公司生物研究所，广东 珠海 519041; 2.遵义医学院珠海校区·贵州省免疫学研究生教育创新基地，广东 珠海 519041)

乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)存在3种颗粒形式，分别是Dane颗粒、丝状颗粒和球形颗粒[1]。病毒包膜有S蛋白、Pre-S1蛋白和Pre-S2蛋白3种表面抗原蛋白，分别构成了大蛋白(L，Pre-S1+Pre-S2+S)、中蛋白(M，Pre-S2+S)和主蛋白(S)3种形式[2]，因Pre-S1和Pre-S2易被宿主蛋白酶降解，通常基因工程生产的乙肝疫苗产品主要成分是由约100个S蛋白、糖和脂组成直径约22 nm的球形病毒样颗粒(virus-like Particles，VLPs)，S蛋白病毒样颗粒的免疫原性是S蛋白单体1000倍以上[3]，HBsAg结构复杂，在纯化过程中会受到诸多因素的影响而遭到破坏，免疫原性也随之降低，整个纯化过程的收率只有30%左右。因此，保持HBsAg结构的完整性和理化性质的稳定性是提高收率的关键。在此根据HBsAg的结构大小、相对分子质量、带电性质、疏水性、吸附特性、密度等性质总结了HBsAg在纯化的3个阶段采用的主流纯化技术。

1 蛋白捕获阶段

1．1 等电点沉淀

蛋白质在等电点时，净电荷为零，分子间作用力减弱，颗粒碰撞凝聚而形成沉淀物，可以利用该性质进行蛋白初步分离。Hardy等[4]在大规模生产HBsAg时，将破碎液的pH从8调到4.5，目的蛋白和等电点在4.5左右的杂蛋白及非蛋白脂类被沉下来，除去了溶解于此环境的其他杂蛋白，起到了初步分离的作用。

1．2 微滤

微滤是一项根据不同物质间颗粒大小的差异进行分离的技术，根据蛋白颗粒大小选择适合膜孔径的滤膜和压力进行筛分或截留。……