赖前成，邓永花，万居易，伍长学，王 波，廖 斌

(1泸州医学院附属医院，四川泸州646000;2成都市第二人民医院)

急性肾功能衰竭(AKI)是心脏手术后最常见的并发症之一，体外循环是目前心脏外科心内直视手术不可避免的复杂的病理生理过程，复杂的管道系统、体外循环转机时间、灌注流量和压力、灌流模式等多种因素可导致患者术后发生肾功能损伤［1］。动物实验或者已有的缺氧复氧细胞培养模型均无法真实模拟这种复杂的环境。为此，本研究2009年12月～2010年12月通过改良细胞培养模型，采用体外循环再灌注血进行人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)缺血再灌注损伤研究，并初步分析可能的分子机理，为进一步研究防治体外循环后肾小管细胞损伤奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂 人HK-2引自ATCC(American Type Culture Collection);DMEM(GIBCO);胰酶(OXODI);胎牛血清(成都哈里公司);Annexin VFITC细胞凋亡检测试剂盒(北京中杉金桥公司); SP-9000免疫组化染色试剂盒(北京中杉金桥公司);多聚赖氨酸，DAB显色试剂盒(武汉博士德公司);其余试剂均为市售分析纯。实验在我院中心实验室实施。

1.2 方法

1.2.1 HK-2细胞株的复苏、培养、传代 从液氮罐中取出冻存的HK-2细胞投入37℃的温水中，摇动使其尽快解冻。吸出细胞悬液并滴加10倍体积的质量分数为10%的胎牛血清的DMEM培养基，混匀，1 000 r/min离心5 min，弃上清液后再重复洗涤1次。用含10%的胎牛血清的DMEM培养液将细胞悬液稀释混匀，接种于100 mL培养瓶中，37℃下5%CO2细胞培养箱中静置12 h，换液除去未贴壁细胞后至细胞长满成片 80%以上。用浓度为0.25%的胰蛋白酶消化，传代。……