陈伟新 杨立群

（1.复旦大学附属中山医院青浦分院普外科，上海 201700；2.第二军医大学附属东方肝胆医院ICU，上海 200433）

文献［1］报道乌司他丁（ulinastatin，UTI）预处理对大鼠肝脏缺血再灌注（ischemia reperfusion，IR）损伤具有保护作用，它可以选择性降低再灌注时活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）的产生，并且减轻肝细胞的坏死和凋亡，但其具体机制目前尚不清楚。高迁移率蛋白B1（high mobility group box 1，HMGB1）是一种重要的内源性损伤相关分子，它广泛分布于哺乳动物淋巴组织及脑、肝、肺、心、脾、肾等器官中，它在肝、脑组织中主要存在于胞浆，但在大多数其他组织中存在于胞核。生理状态下HMGB1的表达量维持在极低的基础水平［2］。HMGB1介导了内毒素诱导的脓毒症，其是内毒素致死效应的晚期重要炎症介质。HMGB1在体内不同器官分布广泛，但目前尚无报道HMGB1是否参与了UTI抑制肝脏IR后炎性反应的过程，本研究旨在探讨这一问题。

1 资料与方法

1.1 实验动物 SD雄性大鼠40只，体质量250～300g，由第二军医大学实验动物中心提供。大鼠在空调室内饲养，室温22～25℃，自由进水和食物，术前12h禁食不禁水。

1.2 实验方法

1.2.1 动物分组及模型的制作 首先将SD大鼠随机分为4组。建立左、中肝门静脉阻断的IR模型，先阻断大鼠门静脉左、中分支45min，然后开放动脉夹再灌注2h。0.9%氯化钠对照组（对照组，n＝10）：再灌注前5min尾静脉注射0.9%氯化钠溶液6mL／kg。UTI预处理组（UTI组，n＝10）：再灌注前5min尾静脉注射 UTI（20U／mL）1.5mL／kg。UTI＋诱导剂组（UTI＋rHMGB1组，n＝10）：阻断前1h予重组HMGB1蛋白10μg腹腔注射，余同 UTI组。UTI＋拮抗剂组（UTI＋Anti－HMGB1组，n＝10）：阻断前1h予 Anti－HMGB1抗体100μg腹腔注射，余同UTI组。

1.2.2 酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆中细胞因子的水平 再灌注后取新鲜血液4～5mL，37℃静置30min、4℃静置2h后3 000r／min离心15min，小心吸取上层血清200μL装于EP管中，采用TNF－α和IL－1特异性ELISA试剂盒，根据说明书步骤操作。……