沈瑶 白春学 金美玲 陈智鸿

（复旦大学附属中山医院全科医学科，＊呼吸科，上海 200032）

气道表面液体是机体抵御有害物质的第一道屏障，机体可以通过纤毛运动清除气道中的病原体和有毒物质［1］。但是，持续过多的黏液会阻塞呼吸道管腔，导致气流受限、气道反复感染。黏蛋白（mucin，MUC）为气道黏液的主要成分，已知人类有20种不同的黏蛋白，MUC5AC和MUC5B为气道分泌物的主要成分，其中 MUC5AC为可诱导性，而MUC5B则多为持续性表达。吸烟、中性粒细胞弹性蛋白酶、大气污染、脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）等均可刺激 MUC5AC的表达［2］。水份占气道黏液总量的95%，水份减少将使黏蛋白／水盐比例升高，凝胶层的黏液会下降，影响黏液－纤毛的摆动。水通道蛋白（aquaporin，AQP）主要参与渗透压驱动下水的转运。AQP1、AQP3、AQP4、AQP5为肺相关的水通道蛋白，其中AQP5位于肺泡Ⅰ型上皮细胞 （alveolar typeⅠcell，ATⅠ）的腔顶面和鼻咽和呼吸道黏膜下腺的上皮细胞腔顶［3］。小鼠屋尘螨致敏的慢性模型显示AQP 5基因敲除鼠肺组织中MUC5AC较野生鼠降低［4］。应用RNAi特异性抑制人肺腺癌细胞株SPC－A1中AQP5的表达，发现MUC5AC表达进行性升高［5］，提示AQP 5在黏液分泌中起着重要的作用。

本研究拟采用黏液下腺SPC－A1细胞株，观察LPS刺激后AQP5和MUC5AC的变化。

1 资料与方法

1.1 细胞培养 SPC－A1细胞株在含10%新生牛血清的RPMI1640培养基中进行常规培养和传代。

1.2 荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reation，PCR） 采用Rotor－Gene RG 3000仪进行检测。①β－actin－sense：5′CCTGTACGCCAACACAGTGC3′，antisense： 5′ ATACTCCTGCTTGCTGATCC3′②AQP5－sense：5′CTGTCCATTGGCCTGTCTGTC3′，antisense：5′GGCTCATACGTGCCTTTGATG3′，③ MUC5AC－sense：5′GAGGGCAACAACGTCATCTCC 3′，antisense：5′TCT TGGTCAGCCACCTTCACA3′。

1.3 Western杂交 酶联免疫吸附试验（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）按常规进行。

1.4 统计学分析 使用SPSS 10.0统计软件，多组间两两比较采用方差分析，组间比较采用Student－Newman－Keuls检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 LPS刺激后AQP5mRNA和AQP5蛋白呈剂量依赖性降低 将 LPS 0μg／mL、5μg／mL、1 μg／mL、20μg／mL、40μg／mL加入SPC－A1细胞株中，24h检测AQP5的蛋白和AQP5mRNA水平（图1）。……