高地 朱鹭冰 李明

（复旦大学附属中山医院皮肤科，上海 200032）

系统性硬皮病（systemic scleroderma，SSc）是一种顽固的自身免疫性疾病，其免疫紊乱表现在多个方面。免疫活性细胞（主要是淋巴细胞）及其相关细胞因子和趋化因子在SSc发病机制中的作用逐渐引起关注［1］。我们的前期研究［2］显示皮肤成纤维细胞外微环境中细胞因子异常可能参与SSc患者皮肤成纤维细胞高胶原合成克隆的形成。外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）以淋巴细胞为主，能产生多种细胞因子。本研究旨在探讨SSc患者的PBMC对具有不同胶原合成能力的皮肤克隆成纤维细胞的胶原代谢的影响。

1 资料与方法

1.1 实验材料 DMEM高糖培养基、胎牛血清由PAA公司生产；小鼠抗人波形蛋白、细胞角蛋白单抗由Abcam公司生产；兔抗人Ⅷ因子多抗由Antibody Diagnostica公司生产；亲和素－生物素－酶复合物显色试剂盒和生物素化马抗小鼠、羊抗兔二抗由Vector公司生产；RNA提取试剂盒由Invitrogen公司生产和cDNA合成试剂盒、荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）试剂盒、引物和TaqMan探针由上海闪晶公司生产；淋巴细胞分离液、植物血凝素（phytohemaggtutinin，PHA）由Sigma公司生产。

1.2 研究方法

1.2.1 筛选SSc和健康皮肤具有不同胶原合成能力的异质性成纤维细胞克隆 选取5例病程＜3年且符合美国风湿病学会1980年分类标准［3］的进展期SSc患者（研究组）分别在局部麻醉下切取其前臂逐渐扩大的硬化皮损边缘的皮肤组织；同时选取4例性别、年龄匹配的整形外科手术者（对照组），在局部麻醉下切取其相应部位的健康皮肤组织。所有研究对象均知情同意。……