陈秋凤,周防震

1.湖北民族学院附属医院(湖北 恩施 445000)2.湖北民族学院生物科学与技术学院(湖北 恩施 445000)

明胶酶，亦称Ⅳ型胶原酶[1]、基底膜性胶原酶[2]等，属于基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases, MMPs)范畴，包括明胶酶A(MMP-2或称72kDaⅣ型胶原酶)和明胶酶B(MMP-9或称92kDaⅣ型胶原酶)，可降解Ⅳ型胶原、明胶和V型胶原等基底膜成分，在组织炎症[3]、纤维化[4,5]、免疫[6]与肿瘤转移[7～9]等诸多过程中发挥重要作用。明胶酶检测方法从最初的明胶酶谱法到现在采用的ELISA法，从粗略定性到逐渐发展为准确定量，方法稳定性、可靠性逐渐完善，操作也变得更为简单。本文就明胶酶测定方法的研究进展进行综述。

1 基于明胶酶催化活性的检测方法

利用明胶酶能催化降解明胶的特点发展建立起来的检测方法主要有明胶酶谱法(Zymography)、荧光明胶酶法和DQ明胶(Dye-quenched-gelatin)原位酶谱法。

1.1明胶酶谱法Kleiner等[10]于1994建立此方法，是一种基于非还原SDS-PAGE电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法。主要原理是：1)含明胶酶的样本首先上样进行非还原SDS-PAGE电泳，利用明胶酶与阴离子去垢剂SDS结合，形成蛋白质-SDS复合物，使待测蛋白质带上相同的负电荷，其量大大超过蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别，此时蛋白质分子在凝胶中的迁移率取决于其分子质量大小；2)SDS-PAGE电泳后利用含阳离子去垢剂(Triton-x 100)的洗脱液洗脱去除SDS，这一过程中引发了明胶酶酶原蛋白体外活化机制，酶原在凝胶内除掉一个约10 kDa的小肽，转变为有活性的酶[11]，降解凝胶中相应部位的明胶。……