孙 涛，刘左军，孙文斌，刘凤梅，李 冰

(兰州理工大学生命科学与工程学院，甘肃 兰州 730050)

ISSR(Inter-simple sequence repeat)又称简单重复序列扩增，是由Zietkiewicz等[1]1994年提出的一种DNA标记技术，是近年来发展起来的一类新型的分子标记技术。ISSR标记技术具有无需知道任何靶标序列的微卫星背景信息、遗传多态性高、检测快等特点，在植物分类与进化、遗传多样性研究以及遗传图谱构建和基因定位方面具有广泛的应用前景[2]。虽然ISSR-PCR具有重复性高的优点[3]，但不同材料、不同引物的扩增条件有异，反应体系不同也可产生不同的结果。因此，有必要建立与优化不同实验材料的ISSR-PCR的反应体系和扩增程序，以期获得稳定、可靠的ISSR 分析结果。

钝裂银莲花(Anemoneobtusiloba)为毛茛科(Ranunculaceae)毛茛亚科银莲花属(Anemone)[4]植物。分布于喜马拉雅山区和青藏高原东缘，祁连山、帕米尔高原一带，多数分布于西南部。由于其生长海拔高、生境分布广泛、进化较为低等，是很好的分子遗传学和分子生态学的研究材料[5]。因此，本研究通过提取甘肃合作的高寒草甸地区钝裂银莲花的DNA，采用ISSR分子标记技术，对银莲花进行ISSR-PCR反应条件优化，以期建立重复性高、反应条件稳定的反应体系，为深入研究高寒草甸银莲花属植物遗传多样性[6]奠定良好的基础。

1 材料与方法

1.1材料 钝裂银莲花样品采集于甘肃省甘南藏族自治州合作市(海拔2 973 m，34°57′ N，102°53′ E)，材料采后立即放入保鲜袋中，用硅胶干燥保存。

1.2实验药品与仪器 引物UBC807(AG)8T、Taq DNA聚合酶、MgCl2、dNTPs、100 bp DNA Ladder Plus Marker(购自上海生物工程有限公司)，PCR仪(型号MG96+，杭州朗基科学仪器有限公司生产)、电泳仪(型号DYY-11，北京六一仪器公司生产)。……