许文志,张新全,黄琳凯,马 啸

(四川农业大学动物科技学院，四川 雅安 625014)

柳枝稷(Panicumvirgatum)为禾本科黍属草本植物，起源于北美洛基山脉以东、55° N以南的大草原，是一种植株高大、多年生暖季型丛生C4植物，通常被用于放牧、水土保持以及生态建设等[1]。柳枝稷生产量大，根系发达，耐贫瘠、洪涝和干旱，能够抵抗多种病虫害，易于收割贮存[2]，能够用于生产能源等特性，因此，国内外许多学者认为柳枝稷是一种具有较大发展潜力的能源作物[3-4]。在美国，柳枝稷作为一种模式能源作物，对其的研究方兴未艾[5]。其中，采用转基因技术增强柳枝稷的抗逆性、提高光合效率、增加生物产量、降低木质素含量和提高乙醇产率等方面已成为目前的研究热点[6]。为此，研究并创建较为高效的组织培养体系是遗传转化体系建立的基础和前提。本研究以柳枝稷成熟种子为外植体，采用两步法灭菌，以MS培养基为基本培养基，研究不同质量浓度2,4-D与6-BA组合对愈伤组织诱导的影响，不同质量浓度GA3对愈伤组织分化的影响，以期建立稳定的柳枝稷组织培养体系。

1 材料与方法

1.1试验材料及处理 试验材料为美国弗吉尼亚理工大学提供的高转化率柳枝稷材料HR8的成熟种子，该材料是从Alamo中经过筛选得到。取脱壳后的柳枝稷种子，用自来水冲洗，去掉杂质，再用自来水浸泡12 h，冲洗后置于4 ℃冰箱内备用。

1.2方法

1.2.1种子灭菌试验 取处理后4 ℃保存的种子，用滤纸吸干表面水分，称取9份，每份10 g。以两步法对种子进行灭菌，即先用70%乙醇处理一定时间，用无菌蒸馏水冲洗后，再用0.1% HgCl2处理，两步处理完成后再用无菌蒸馏水充分洗涤种子3次(表1)。……