李 华 ，罗超华 ，龙亚秋 ，杨 芳

(1.南方医科大学南方医院，广东 广州 510515;2.南方医科大学中医药学院，广东 广州 510515;3.广州中医药大学第二附属医院，广东 广州 510120)

丁溴东莨菪碱为M胆碱受体阻滞药，在其生产过程中引入的溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、三氯甲烷等有机溶剂，为了保证药品的质量和用药安全，对该原料药的残留溶剂的控制显得尤为重要。本试验将生产工艺中涉及的规定(国际协调会，ICH)应控制的有机溶剂及产品中实际残留的有机溶剂作为检测对象，遵循2010年版《中国药典(二部)》附录“残留溶剂测定法冶的指导原则[1]，采用顶空气相色谱法，同时测定几种有机溶剂，方法简便，结果准确可靠，重现性好，适用于对丁溴东莨菪碱原料药中5种残留溶剂的同时检测与分析，现报道如下。

1 仪器与试药

岛津GCAF－2010型气相色谱仪，配置FID检测器，顶空进样器:DANIHSS 86.50，配置20 mL顶空瓶。无水甲醇、乙醇、丙酮、三氯甲烷、乙腈、二甲基甲酰胺(DMF)均为分析纯，购于广州化学试剂厂。丁溴东莨菪碱(成都第一制药原料药有限公司，批号分别为 010119，010219，010319，010419)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent DB－624 柱(0.53 mm ×30 m，3 μm);柱温:初始温度60℃，保温10 min;以40℃ /min升至180℃，保温5 min;进样口温度:140℃;检测器温度:260℃;载气:N2;载气流速:6 mL/min;分流比:1∶5;顶空条件:平衡温度80℃;平衡时间30 min，进样针温度85℃，加压时间0.5 min，进样体积1 mL。

2.2 溶液配制

空白溶液:精密吸取纯化水5.0 mL，置20 mL顶空瓶中，密封，备用;标准贮备溶液 A:称取丙酮约 0.6 g，甲醇约 0.4 g，乙醇约 0.6 g，乙腈 0.06 g，精密称定，加入装有 2 mL DMF 的 25 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混合均匀;标准贮备溶液B:称取三氯甲烷0.05 g，精密称定，加入装有2 mL DMF的100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混合均匀;标准贮备溶液C:精密吸取2.0 mL标准贮备溶液A，1.0 mL标准贮备溶液B，置100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混合均匀;标准溶液:取标准贮备溶液B 5.0 mL，置20 mL顶空瓶中，密封，混合均匀，平行制备6份;供试液:精密称取样品0.5 g，置20 mL顶空瓶中，加入5.0 mL水，密封，使溶解混合均匀。

2.3 方法学考察

系统适用性试验:将标准溶液6份，按2.1的检测条件，连续进样6针，记录色谱图，见表1和图1 A。结果表明，系统适用性良好。

表1 系统适用性试验数据

专属性试验:取空白溶液进样，作为溶剂空白，记录色谱图。溶剂DMF及水对待测溶剂的测定无明显干扰。见图1 B。取标准溶液进样，记录色谱图(图1 A)，结果甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、三氯甲烷相邻两相溶剂之间分离度 R 分别为 10.6，4.8，3.6，19.2，均大于3.0。可见，本试验的专属性良好。见图1 B。

重复性试验:取标准溶液6份，连续进样，计算各溶剂峰面积，甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、三氯甲烷的峰面积的 RSD分别为4.5% ，3.2% ，1.2% ，2.5% ，2.6% ，均小于 10.0% ，表明方法的重复性良好。

线性关系考察:分别取2.2项下的标准贮备溶液A 0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL，置 100 mL 容量瓶中，另取标准贮备液B 0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL 加入上述对应容量瓶中，加水稀释至刻度，即得编号1～7标准溶液。由低浓度至高浓度，分别精密吸取编号1～7标准溶液5 mL，置20 mL顶空瓶中，密封，同法制备3份。设定顶空条件，在80℃平衡30 min，分别进样，记录色谱图。以标准溶液中甲醇、丙酮、乙醇、三氯甲烷的峰面积对其质量浓度(以μg/mL计)，进行线性回归，峰面积对其质量浓度呈现良好的线性关系，相关系数均大于0.995，表明该方法的线性关系良好。结果见表2。

图1 高效液相色谱图

表2 线性方程及相关系数

准确度试验:取丁溴东莨菪碱样品，研细，充分干燥，将其中残留溶剂降至较低水平，作为样品空白。

分别取标准贮备溶液 A 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL 至 100 mL容量瓶中，另取标准贮备液 B 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL 加入上述对应容量瓶中，加水稀释至刻度，即得编号为1～5的标准溶液。取20 mL顶空瓶15个，分为5组，每组3个，各精密称取丁溴东莨菪碱样品空白 0.50 g，另取编号 1，2，3，4，5 标准溶液各5 mL，分别加入到每组顶空瓶中，使溶解，密封，混合均匀。得到相当于三氯甲烷、乙腈最大允许残留限度的167%，133%，100%，67%和33%，相当于丙酮、乙醇、甲醇限度的125%，100%，75%，50%和25%的测试溶液。精密吸取4 mL标准贮备溶液A，1.5 mL标准贮备溶液B至100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混合均匀作为标准溶液，共制备6份。取标准溶液和测试溶液进样，记录色谱图，计算每个溶剂每个质量浓度的回收率。结果甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、三氯甲烷的平均回收率分别为 98.6%，100.8%，99.9% ，98.9% ，98.6% ，均在 90.0% ～110.0% 范围内，表明方法的准确度高。

检测限确定:取线性关系考察项下标准溶液，逐步用溶剂稀释，得到适当质量浓度的溶液。在2.1项下色谱系统下分别进样，记录色谱图。当待测组分的信噪比为2～3倍时，对应的质量浓度为该组分的最小检测质量浓度，见表3。

表3 丁溴东莨菪碱残留溶剂的检测限数据表

2.4 样品含量测定

取4批丁溴东莨菪碱样品，按上述色谱方法测定，按外标法以峰面积计算各样品中有机溶剂残留量。结果表明，4批样品中甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、三氯甲烷的残留量均低于设定认可的限度规定。见表4。

表4 4批溶剂的残留结果

3 讨论

本试验选择了Agilent DB－624毛细管色谱柱，采用程序升温，使5种有机溶剂达到了完全分离，且在10 min内已全部出峰，大大缩短了分析时间，提高了分析效率;选择DMF作为溶剂，与被测的5种溶剂能互溶，不干扰被测组分的测定。

本试验中三氯甲烷不溶于水，可先加入一定量的DMF助溶后再加水。因为水是顶空进样系统的首选溶剂，水中不含有机溶剂，干扰较少，且在FID检测器上、以水为溶剂时，各残留溶剂的灵敏度最高。专属性方法学验证结果表明，DMF未造成干扰。

顶空时间要确保供试品溶液的气－液相达到平衡，可通过测定顶空时间与顶空气体浓度－时间曲线来确定，顶空时间不宜过长，一般为30～45 min。如果过长，可能引起顶空气瓶的气密性变差，导致定量的准确性降低，如果时间不够，那么就不能保证气－液两相达到平衡。经试验摸索，本试验选择了30 min。

药品中有机溶剂残留量检测尽管有很多报道，但不同的药品测定的种类各异[2]。甲醇等5种溶剂均为合成过程中使用而且在2010年版《中国药典(二部)》中要求检查的对人体有害的有机溶剂。因此，检测丁溴东莨菪碱原料药中这5种溶剂的残留，对于丁溴东莨菪碱的质量控制和安全使用有着十分重要的意义。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:附录ⅧP.

[2]韩学静，袁志芳，杜玉民，等.毛细管气相色谱法测定间尼索地平有机溶剂残留量[J].药物分析杂志，2009，29(9):1 193－1 195.