APP下载

不同纯度的有机溶剂对2株肿瘤细胞的抑制作用

2015-03-24周松林等

中国当代医药 2015年5期
关键词:纯度

周松林等

[摘要] 目的 给脂溶性的抗肿瘤药物筛选高溶解性、低细胞毒性的有机溶剂。 方法 采用MTT法,按照不同纯度,对8种能溶于水的有机溶剂,测试其对黑色素瘤B16、人胃癌细胞SGC-7901两种细胞株的细胞毒性。 结果 不同有机溶剂对不同细胞株的抑制皆不同,甲醇与丙酮对两种细胞株的毒性相对都较弱,纯度越高的有机溶剂对细胞毒害越小。 结论 光谱纯的甲醇与丙酮是脂溶性抗肿瘤药物有效的有机溶剂。

[关键词] MTT;细胞毒性;有机溶剂;纯度

[中图分类号] R915 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2015)02(b)-0144-03

Inhibitory effect of different purity organic solvents on two tumor cells

ZHOU Song-lin LIN Ying-ying ZHAO Huan-ge HUANG Yong-hao

Key Laboratory of Tropical Medicine,Hainan Medical College,Haikou 571199,China

[Abstract] Objective To select organic solvents with low cytotoxicity for dissolve some compounds which had bad water-solubility in screening antitumor agent compound. Methods The cytotoxic effect of 8 organic solvents both can dissolve in water and fat soluble organic solvents with different purity on two tumor cell lines(B16 and SGC-7901)were tested by MTT. Results Different organic solvents inhibit different cell lines were different,the effect of methanol and acetone toxicity on two kinds of cell lines were relatively weak.The higher the purity of the organic solvent on two tumor cell had low toxicity. Conclusion The spectrum class pure methanol and acetone are effective organic solvent of fat-soluble anticancer drugs.

[Key words] MTT;Cytotoxicity;Organic solvents;Purity

在体外筛选抗肿瘤药物时,常碰到被筛选的药物不能溶于细胞培养液中,这需要借助有机溶剂才能溶解,因此,溶解样品的有机溶剂既要能较好地溶解药品,使之溶于培养液中,又需要在一定的浓度范围内对供试细胞株毒性尽可能小。这样低细胞毒害的溶剂才不会对药物的抗肿瘤作用产生假阳性。虽然有不少文献报道不同的溶剂对不同的细胞毒害都不一样[1-5],但这些文献很少涉及不同纯度有机溶剂对细胞毒害的作用,且不少文献涉及有些不溶于水的有机溶剂,因此,本文通过比较几种常见溶于水的分析纯和光谱纯的有机溶剂,来测试对2株常见的细胞黑色素瘤B16和人胃癌细胞SGC-7901的毒害作用。

1 材料与方法

1.1 肿瘤细胞系

黑色素瘤细胞B16、人胃癌细胞SGC-7901,从中国科学院上海药物研究所肿瘤细胞库引进,并在本室长期传代培养。

1.2 试剂与药物

RPMI-1640培养基,Gibco公司;MTT,Sigma公司;新生小牛血清,杭州四季青公司;甲醇、乙腈、四氢呋喃(THF)、二甲亚砜(DMSO)、丙酮、乙醇、甘油、异丙醇、分析纯(analytical pure,AR)的为国产分析纯,光谱纯(spectrum pure,SP)购自美国天地公司;二氧化碳培养箱,Heroes公司;酶标仪,美国Biotech公司。

1.3 细胞毒试验

采用MTT法进行测试[6-7],取对数生长期的B16、SGC-7901细胞株,调整细胞浓度为5×103/ml,加入96孔板中,180 μl/孔。细胞在培养箱中放置4 h待贴壁后再加待测溶剂,每孔分别加入不同体积的溶剂(1.0、2.0、5、10、15、20 μl),然后再加入细胞培养也补齐200 μl/孔的体积,阴性对照为等体积的细胞培养液,37 ℃、5% CO2培养箱中孵育36 h后,分别加入MTT 5 mg/ml,20 μl/孔,继续培养4 h后,轻轻吸去上层清液,再向每孔加入150 μl DMSO溶解蓝紫结晶甲瓒,用酶标仪在540 nm波长下测定各孔的OD值,实验重复3次。

2 结果

2.1 有机溶剂对B16细胞增殖的抑制率

8种不同纯度的有机溶剂对B16的毒害作用见表1,其中光谱纯的丙酮对B16的伤害最小,IC50的抑制体积分数为11.05%,其次是光谱纯的甲醇,毒性最大的是分析纯DMSO。当溶剂的体积分数为5.0%时,甲醇、丙酮对细胞的均无明显毒害作用。

表1 不同有机溶剂对黑色素瘤B16的毒害作用(%)

“-”表示无明显抑制

2.2 有机溶剂对SGC-7901细胞增殖的抑制率

8种有机溶剂对SGC-7901的毒害作用见表2,其中光谱纯乙腈的毒害作用最小,其IC50体积分数为9.93%;其次为色谱纯的甲醇IC50为9.88%,甘油对SGC-7901细胞毒害最大,当溶剂的体积分数为2.5%时,只有光谱纯的甲醇和丙酮对细胞伤害不明显。

表2 不同有机溶剂对人胃癌细胞SGC-7901的毒害作用(%)

“-”表示无明显抑制

3 讨论

3.1 不同溶剂对同一细胞株具有不同的细胞毒作用

在所测试的8种有机溶剂中,光谱纯的甲醇和丙酮对两种肿瘤供试细胞株毒性都比较弱,在对B16细胞毒害实验中,其光谱纯甲醇、THF、丙酮和分析纯的丙酮等4种溶剂的IC50均>9%,分析纯DMSO的IC50体积分数却只有1.41%。在SGC-7901细胞毒害实验中,色谱纯的甲醇和乙腈的IC50的体积分数均>9%,但IC50的体积分数<2%的有分析纯的THF、DMSO,因此,不同有机溶剂对某一细胞株的毒害皆不相同。

3.2 同一溶剂对不同细胞株具有不同细胞毒作用

相同的溶剂对不同细胞株的毒害也有明显不同,如乙腈和四氢呋喃在两种细胞株表现的不同,光谱纯乙腈和分析纯的乙腈对B16的IC50仅为2.44%和2.19%,而对SGC-7901的IC50为9.93%和8.05%;THF与丙酮对二株细胞系的IC50相差也比较大,只有色谱纯的甲醇对两株细胞毒害相差不大,因此,同一溶剂对不同细胞株是其毒害作用也不一样。

3.3 不同纯度溶剂对同一细胞株有不同细胞毒作用

不同纯度的溶剂细胞株的毒害也不相同,光谱纯与分析纯的甲醇对B16和SGC-7901的毒害IC50体积分数相差都约1.5倍,色谱纯与分析纯的DMSO对B16的毒害IC50体积分数相差2.6倍,对SGC-7901的IC50体积分数相差2.7倍,实验得出,光谱纯的有机溶剂明显比分析纯的有机溶剂在同一浓度下对细胞毒害小。

在已报道的研究结果中,有报道甲醇、丙酮、甘油、乙醇和DMSO对某一细胞株表现出最低细胞毒性[1-5,8-12],这是因为不同实验中所选的细胞株不同,而同一种有机溶剂对不同细胞株表现的毒性不同;也可能是有机溶剂购买的时间较长,造成溶剂的纯度发生了改变,因而表现出不同的细胞毒性。在筛选抗肿瘤药物时,有必要先对已有的有机溶剂测试其对所测试细胞系的细胞毒害实验,再选择合适的有机溶剂,且在实验过程中尽量购买纯度高、新鲜的溶剂来溶解药品,减少实验误差,还需要考虑的是,在一些有颜色的样品中,颜色的变化也对MTT有很大的影响[12]。

[参考文献]

[1] 纪舒昱,翁稚颖,周轶平,等.8种有机溶剂对肿瘤细胞的细胞毒作用[J].云南大学学报(自然科学版),2001,23(6):457-460.

[2] 王振斌,马海乐,许文荣,等.有机溶剂对肿瘤细胞的细胞毒作用[J].江苏大学学报(医学版),2005,15(3):201-204.

[3] 王文娟,雒向宁,马晓军,等.8种有机溶剂对人肝癌细胞HepG2及SMMC7721的细胞毒作用[J].现代中医药,2013,33(4):85-86.

[4] 刘琦,谢锦艳,冯改利,等.不同有机溶剂对人胃癌SGC-7901和结肠癌HT29细胞的细胞毒作用[J].陕西中医,2014,35(5):601-603.

[5] 王庆利,何丹,郑晓冬,等.有机溶剂对细胞的毒害及细胞的耐受性机制[J].微生物学通报,2002,29(4):81-85.

[6] 罗奇志,林琳,王芙艳,等.MTT方法的优化[J].激光生物学报,2014,23(3):279-282.

[7] 司徒镇强,吴军正.细胞培养[M].西安:世界图书出版公司,2004:199.

[8] 吴兆亮,胡滨,郑辉杰,等.两液相培养中有机溶剂对细胞毒性的研究进展[J].生物技术,2000,10(2):37-40.

[9] 宋凤艳.肿瘤细胞ECA109对甲醇等4种有机溶剂耐受剂量分析[J].井冈山大学学报(自然科学版),2014,35(5):88-93.

[10] 宋凤艳.肿瘤细胞ECA109和PC12对二甲基亚枫耐受剂量的分析[J].科学技术与工程,2013,13(14):27-32.

[11] 吴迪,巴哈尔古丽·卡哈尔,吴桂荣.溶媒二甲基亚砜对细胞生长与活力的影响研究[J].新疆医科大学学报,2010,33(5):489-491.

[12] 陈艳华,黎丹戎,侯华新,等.不同溶剂和受试物颜色对MTT实验的影响[J].广西医科大学学报,2007,24(1):17-19.

(收稿日期:2015-01-04 本文编辑:李亚聪)

猜你喜欢

纯度
磷酸法合成肌苷酸工艺的优化
标志色彩的重要性及应用
300MW汽轮发电机组氢气纯度下降原因分析与治理
滨海热电#1发电机氢气纯度降低原因浅析
如何让学生在设计中有效认识和使用色相环
间接滴定法测定氯化铜晶体的纯度
“千足金”纯度命名拟取消
春兰基因组DNA提取方法的比较
三色堇叶片DNA不同提取方法比较
美拒绝伊朗核燃料交换提议