王春晖 钱福初

(1.湖州市八里店镇卫生服务中心,浙江 湖州 313000;2.湖州市中心医院,浙江 湖州 313000)

乙型肝炎血清学标志物是诊断乙肝病毒感染的常规免疫学检测方法,但在日常检验工作中往往会遇到一些异常的血清学模式,如HBsAg和HBsAb同时阳性,HBsAg阴性但 HBeAg阳性,仅 HBeAb强阳性,仅HBcAb强阳性等。本实验应用荧光定量PCR方法对这些患者血清HBV进行检测,了解乙肝血清标志物少见模式患者乙肝病毒载量状况。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2009年10月～2011年5月在湖州市吴兴区八里店镇卫生服务中心就诊患者及湖州市中心医院就诊患者检测乙肝血清标志物样本中收集的少见模式血清标本270例(其中吴兴区八里店镇卫生服务中心35例,湖州市中心医院235例)诊断标准均符合2005年中华医学会肝病学分会和感染病学分会联合制定的《慢性乙型肝炎防治指南》[1],包括 HBsAg和 HBsAb同时阳性97例,男60例,女 37例,年龄 9～78岁,平均(42.6±15.8)岁;HBsAg阴性但 HBeAg阳性 8例,男 7例,女 1例,年龄22～68岁,平均(48.2±15.5)岁;仅 HBeAb强阳性60例,男 36例,女 24例,年龄 18～76岁,平均(53.2±14.5)岁;仅 HBcAb强阳性105例,男 60例,女45例,年龄19～81岁,平均(59.2±13.4)岁。血清标本储存于-80℃备用。

1.2 主要试剂和仪器 ELISA检测试剂盒购自上海科华生物科技有限公司;HBV荧光定量PCR试剂盒购自深圳匹基生物工程股份有限公司;荧光定量PCR分析仪为Roche公司Light Cycler实时定量PCR仪。

1.3 血清乙肝标志物检测 采用ELISA方法检测乙肝血清标志物,按照试剂操作说明书进行。检测HBsAg、HBsAb、HBeAg时当样本OD值 S/CO ≥1.0,判断为阳性;检测HBeAg、HBcAb时当样本OD值S/CO≤1.0,判断为阳性。

1.4 HBV-DNA定量检测 采用HBV-DNA荧光定量PCR试剂盒检测血清标本HBV载量,反应在Light Cycler实时定量PCR仪上完成,严格按照标准操作规程进行。该试剂检测灵敏度为1×103copies/mL。

1.5 统计学处理 用SSPS 11.0软件进行数据分析,计量资料用 t检验,计数资料用χ2检验。

2 结 果

2.1 不同血清学模式HBV阳性检出情况 几种血清模式的 HBV检出率见表1。HBsAg和 HBsAb同时阳性患者中 HBV-DNA阳性率较高,达50.5%。HBsAg阴性血清学模式的173例样本中(包括 HBsAg阴性、HBeAg阳性8例,仅 HBeAb阳性60例,仅HBcAb阳性标本105例)检测到13(8+2+3)例 HBV-DNA阳性患者,占7.5%(13/173)。两者比较差异有统计学意义(P＜0.01)。

表1 不同血清标志物模式患者HBV-DNA检出率

2.2 少见血清学模式HBV-DNA载量 HBsAg和HBsAb同时阳性患者中 HBV-DNA载 ≥1×105copies/mL的占51.0%(25/49),HBsAg阴性少见血清学模式的13例样本(包括 HBsAg阴性、HBeAg阳性8例,仅HBeAb阳性2例和仅HBcAb阳性标本3例)HBV-DNA含量≥1×105copies/mL很少,仅占7.7%(1/13),见表2。两者率的比较差异有统计学意义(P＜0.05)。HBsAg阳性组和 HBsAg阴性组HBV-DNA载量比较差异有统计学意义(P＜0.05)见表3。

表2 不同少见模式患者HBV-DNA水平比较

表3 HBsAg阳性组和HBsAg阴性组HBV-DNA载量比较

表3 HBsAg阳性组和HBsAg阴性组HBV-DNA载量比较

?

3 讨 论

在实际的检验诊断工作中乙肝免疫学标志物并非“大三阳”“小三阳”如此简单,而往往会出现一些少见的结果。本实验对出现HBsAg和HBsAb同时阳性,HBsAg阴性但 HBeAg阳性,仅 HBeAb强阳性,仅HBcAb强阳性这几种情况的HBV-DNA状况进行了分析。

一般认为HBsAb是一种保护性抗体,可以中和HBsAg,清除乙肝病毒,往往在病程恢复期开始出现。但国内外均有报道在检测中出现抗原抗体同时存在的现象[2-4],并且在共阳性的患者中,确实有部分患者血清中存在HBV-DNA。本文的实验结果显示在HBsAg和HBsAb同时阳性患者中,HBVDNA水平＞1×103copies/mL占到50.5%,病毒载量较高者＞1×105copies/mL的占25.8%,可见 HBsAb的出现并不能有效清除HBV感染,并不意味着病情的好转,需要临床重视加强这部分患者的随访。对于这一现象许多研究认为是S基因变异导致HBsAb与变异HBsAg结合力下降而形成[5-6];也可能是不同亚型HBV重叠感染使产生抗体的亚型与存在抗原的亚型不一致而引起[7],还有待进一步研究探讨。

HBsAg是诊断乙肝病毒感染的重要标志物,也是我国献血者筛查的规定项目,S基因突变影响抗原决定簇的识别是诊断失败的重要原因;另外S基因突变可能影响抗原的合成、分泌、表达,导致血中表面抗原的水平低于试剂检测能力,而造成对HBV感染的漏检。许多研究都显示HBsAg阴性并不能完全排除HBV感染的可能性,这样给输血安全带来极大的隐患。陈长荣等[8]在9023例HBsAg阴性的无偿献血者中,发现17例HBV-DNA阳性;黄象艳等[9]研究表明在183例单独 HBcAb阳性的样本中有3例HBV-DNA阳性。本实验在HBsAg阴性的几个少见血清学模式的样本中检测到13例HBVDNA阳性患者,占7.5%(13/173),但所有的样本的HBV-DNA载量均比较低,大多在103～105copies/mL,可能由于循环中的HBsAg较低而低于试剂盒检测灵敏度而不能被检出。本实验还发现HBsAg阴性但HBeAg阳性模式所有样本均为HBV-DNA阳性,并且这8例患者的 HBcAb均为阳性,仅 HBcAb阳性的样本中也有3例HBV-DNA阳性,所以HBsAg阴性而HBV-DNA阳性的患者中84.6%(8+3/13)为HBcAb阳性。因此对HBcAb阳性而HBsAg阴性的样本有必要进行核酸检测进行排除HBV感染。国外也有报道为了减少隐匿HBV感染的可能而对献血者增加HBcAb的筛查[10],必要时间需进行核酸检测。

总之,临床需对少见乙肝免疫学标志物模式引起注意,可利用基因测序技术对其原因进行进一步分析,同时重视乙肝的核酸筛查防止临床诊断失误,特别是隐匿HBV感染引起的输血安全隐患。

[1] 中华医学会肝病学分会、感染病学分会,慢性乙型肝炎防治指南,中华肝脏病杂志,2005,13(12)：881

[2] 钱福初,邹伟华,王翔,等.血清乙肝表面抗原和表面抗体共阳性感染者特点分析.中国卫生检验杂志,2010,20(4)：815

[3] 王蕾,刘华,章励,等.乙型肝炎血清标志物HBsAg和HBsAb同时阳性模式的相关研究.检验医学,2008,23(5)：530

[4] Colson,Borentain P,Motte A,et al.Clinical and virological significanceof the Co-existence of HBsAg and anti-HBs antibodies in hepatitis B chronic carriers.Virology,2007,367(1)：30

[5] Mesenas SJ,Chow WC,Zhao Y,et al.Wild-type and“a”epitope variants in chronic hepatitis B virus carriers positive for hepatitis B surface antigen and antibody J Gastroenterol Hepatol,2002;17：148

[6] Lada O,Benhamou Y,Poynard T,et al.Coexistence of hepatitis B surface antigen(HBs Ag)and anti-HBsantibodiesin chronic hepatitis B virus carriers：influence of“a”determinant variants J Virol,2006,80(6)：2968

[7] 骆抗先.乙型肝炎基础和临床.2版.北京：人民卫生出版社,2001：56,530

[8] 陈长荣,袁权,葛胜祥,等.无偿献血者中隐匿性乙型肝炎病毒感染及表面抗原突变分析.病毒学报,2009,25(3)：178

[9] 黄象艳,李晓娣,黄象娟,等.抗-HBc单项阳性患者中的隐匿性HBV感染.中华实验和临床病毒学杂志,2010,24(3)：221

[10]Urbani S,Fagnoni F,Missale G,et al.The role of anti-core antibody response in the detection of occult hepatitis B virus infection.Clin Chem Lab Med,2010,48(1)：23