张双科 任明慧 姜海毅 陈磊 李杨△

（1泰山医学院 山东泰安 271016；2青岛市市立医院 山东青岛市 266011）

结直肠癌是人类常见的消化道恶性肿瘤，以41～51岁发病率较高，近年来其发病率逐渐上升。然而其发生发展机制尚未完全明确。研究表明CD24和PDGF-D参与多种肿瘤的发生、发展和转移的过程［1～4］，但关于两者在结直肠中的报道鲜见。为探讨CD24和PDGF-D与结直肠癌发生发展的关系，本实验采用逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）检测结直肠癌组织及其相应的切缘正常组织中CD24mRNA和PDGF-D mRNA的表达水平，并分析它们与结直肠癌临床病理之间的关系。

1 材料与方法

1.1 材料 标本取自2010年7月至2011年8月于青岛市市立医院普外科接受手术治疗的54例结直肠癌患者，年龄37～78岁，术前均未接受任何化疗或放疗。标本离体后立即取材，癌组织取自结直肠癌病灶（避开肿瘤中心坏死组织），正常组织取自距结直肠癌病灶边缘＞5cm的切缘正常组织，取材过程严格遵守无菌操作。将所取标本迅速放入已标记的冻存管，置于液氮中备用。所有标本术后均经2位以上病理科资深医师证实。

1.2 试剂与仪器设备 RNAprep pure动物组织总RNA 提取试剂盒（TIANGEN 公司）；Quantscript c DNA第一链合成试剂盒（TIANGEN公司）；2×Taq PCR Master Mix（TIANGEN 公司）。Allegra 64R高速冷冻离心机（美国BECKMAN）；SW-CJ-1D净化台（苏州净化）；电热恒温水浴锅（上海博讯）；Multigene梯度PCR仪（美国Labnet）；GelDoc2000凝胶成像系统（美国BIORAD）。

1.3 RT-PCR检测 CD24m RNA 和 PDGF-D m RNA

1.3.1 RNA提取与逆转录 RNA提取操作步骤按照TIANGEN RNAprep pure动物组织总RNA提取试剂盒的说明书进行。所提取的RNA溶液用琼脂糖凝胶电泳检测总RNA完整性；并且判断RNA纯度：OD260／OD280读数在1.8-2.1之间为纯度合格。……