聂祝青 田小林 朱小宝

（桂林医学院附属医院胃肠外科 广西桂林 541001）

结直肠癌是常见恶性肿瘤，发病率以平均每年4.2%的速度上升［1］。研究发现，凋亡抑制蛋白家族成员中，survivin是最强的凋亡抑制因子［2］，其选择性表达于癌组织中，且在正常组织中几乎不表达［3］。国内外针对此因子与结直肠癌物学特性及临床特点之间的关系的研究较多，绝大部分是运用免疫组织化学方法，其结论尚不一致。本次实验旨在通过检测survivin m RNA在结直肠癌组织中的表达情况，探讨其与结直肠癌发生、发展及预后的关系。

1 材料与方法

1.1 一般资料 标本取自2010年6月至2011年6月在桂林医学院附属医院住院行根治性手术的60例原发性结直肠癌患者，所有标本均有明确的病理诊断结果，术前均未经化疗、放疗或免疫治疗。其中男27例，女33例；结肠癌35例，直肠癌25例；低分化癌24例，中高分化癌36例；有淋巴结转移29例，无淋巴结转移31例；Dukes A期12例，B期19例，C期26例，D期3例。并取40例患者癌旁正常组织（距肿瘤边缘10cm以上）各1块。取下组织后用DEPC水处理，并立即置于液氮中冷冻，再转移至－80℃低温冰箱中保存。

1.2 试剂 RNA提取试剂盒和反转录试剂盒购自北京艾德莱生物科技有限公司，RT-PCR检测试剂盒购自北京康为世纪生物科技有限公司。

1.3 引物的设计及合成 参见表1。

表1 引物序列

1.4 总RNA的提取 从－80℃冰箱取出组织，约50mg，在液氮中快速研磨成粉末状，再转移至EP管中，按RNA抽提试剂盒说明抽提总RNA。取部分RNA测定OD值，检测其浓度。并行RNA琼脂糖凝胶电泳，以检测RNA纯度及完整性。……