白云凤，闫建俊，张耀，张忠梁，冯瑞云，张维锋

（山西省农业科学院作物科学研究所，农业部黄土高原作物基因资源与种质创制重点实验室，山西 太原 030032）

马铃薯纺锤块茎类病毒（Potato spindle tuber viroid，PSTVd）是发现最早的一种类病毒，也是已知最小的可以在寄主体内自我复制的病原。其分子是单链环状裸露的RNA，没有外壳蛋白质包裹，因此，没有免疫原性。PSTVd是引起马铃薯品种退化的重要病害之一[1-2]，它能在细胞核内复制和累积，茎尖脱毒都难以剔除。其传播途径广泛，包括汁液传播（切刀、种薯切块间摩擦、农机具以及茎、叶接触等扩散）、媒介昆虫传毒、实生种子带毒等。根据受侵染植株出现的症状，PSTVd可分为强系、弱系和中间株系。强系通常能使植株减产60%以上。PSTVd侵染后潜伏期长并能持续感染，使马铃薯产量和品质严重下降，而迄今尚无有效方法防治。

本研究通过构建PSTVd的cDNA侵染性克隆，使人们在DNA水平上能开展该病毒的分子生物学研究，亦为采取有效措施进行防治提供依据，为类病毒的毒源保存提供新的途径。

1 材料和方法

1.1 供试材料

感病薯块采自山西省阳曲县，品种为紫花白。番茄品种为矮红宝，由山西省农科院作物科学研究所转基因实验室保存。克隆载体pBS-T购自Takara生物公司，大肠杆菌Top10由山西省农科院作物科学研究所转基因实验室保存。生化和分子生物学试剂包括 RNA酶抑制剂（Rnasin），M-MLV 反转录酶，Taq DNA 聚合酶，dNTP，T7 RNA聚合酶等，均购自Takara生物公司。琼脂糖凝胶回收试剂盒购自博迈德生物公司。

1.2 PSTVd的cDNA合成和PCR扩增

1.2.1 引物设计 根据报道的PSTVd同源序列设计合成1对引物，正向引物：5′-ATCCCC GGGGAAACCTGGAGCGAAC-3′；……