王莹莹王德培，2李可乐魏征刘鹏

(1.天津科技大学生物工程学院，天津300457；2.工业微生物教育部重点实验室，天津300457)

纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)是发酵日本传统食品纳豆的益生菌，属于枯草芽孢杆菌的一个亚种。纳豆芽孢杆菌能分解大分子物质，产生氨基酸、有机酸、寡聚糖等易于吸收的成分，这些成分具有多种保健功能，如抗菌、溶血栓、抗肿瘤、抗氧化、降血压、预防骨质疏松等；另外，纳豆芽孢菌能分泌各种酶和维生素，促进小肠黏膜细胞的增殖，保证肠道功能的正常[1]。因此，纳豆芽孢杆菌广泛用于各领域，对其微生态制剂的开发已成为国内外学者的研究热点。

本研究以实验室保存的一株自日本市售纳豆中分离的纳豆芽孢杆菌为对象，优化其液体发酵条件，为纳豆芽孢杆菌的广泛应用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

菌种为纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)，由天津科技大学生化工程研究室保存。

种子培养基:蛋白胨10 g/l、牛肉膏5.0 g/l、NaCl 5.0 g/l、pH值7.2～7.4，固体培养基需加20 g/l的琼脂。

初始发酵培养基：葡萄糖5.0 g/l、蛋白胨5.0 g/l、柠檬酸钠1.0 g/l、MgSO4·7H2O 0.2 g/l、K2HPO44.0 g/l、KH2PO46.0 g/l，pH值7.0～7.2。

1.2 培养方法

种子培养：将纳豆芽孢杆菌由肉汤斜面接种至种子培养基中（三角瓶，50 ml/250 ml），37℃、200 r/min培养11 h；

发酵培养：发酵培养基成分和发酵条件根据试验进程相应改变。

1.3 测定方法[2]

1.3.1 测定吸光值

利用分光光度计，在波长为600 nm条件下测定菌液的吸光值(OD值)，测定时菌液用无菌生理盐水稀释10倍。

1.3.2 生长曲线测定

取培养好的纳豆芽孢杆菌斜面，接种于含50 ml肉汤培养基的250 ml三角瓶中，振荡培养11 h后，按接种量2%转接25瓶50 ml/250 ml肉汤培养基，37℃、200 r/min培养，每1 h取样一次，测定菌液的吸光值，以未接种的培养基作为空白对照。……