蒋斌元，张 齐，康 敏，王胜利，龚建华，洪亚辉

（1.湖南农业大学生物科学技术学院，湖南 长沙 410128；2.株洲市农业科学研究所，湖南 株洲 412000）

水稻是一种重要的粮食作物，是人类主要的粮食来源，提高水稻产量以及防治病虫害一直是科研工作者们努力的方向[1]。普通野生稻是栽培稻的近缘祖先，保有许多宝贵的基因资源，是水稻突破性育种与生产的重要基因源[2-4]。在茶陵已发掘的新石器时代大塘文化遗址中发现了已碳化的谷物堆，由此可见，茶陵地区谷物种植历史悠久，茶陵野生稻具有重要的研究价值。湖南农业大学细胞生物学研究室与株洲农业科学研究所合作，将茶陵野生稻的基因组DNA采用花粉管通道法[5]导入受体栽培稻R9810、RCP08-29，其中R9810这一系中获得的后代已培育到第4代，表型各异，表现出明显的耐寒能力并且具有对株洲当地稻瘟病菌小种的抗性。笔者以茶陵野生稻及其导入后代为研究对象，辅以受体材料为对照，采用RAPD方法[6-9]研究总基因组导入后在遗传上所造成的影响，旨在配合大田表型筛选，为后续有目的性地筛选试验材料提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

供试材料为茶陵野生稻（W）、超级稻R9810（C）、 导入后代D4（1：ys09203；2：ys09004；3：ys090015；4：ys090026；5：ys090027c）

1.2 方法

1.2.1 总DNA的提取 将供试材料洗净剪碎分别置于研钵中，加入液氮研磨破碎细胞，使用CTAB法[10]提取DNA，电泳检测。

1.2.2 RAPD扩增 经过多次筛选确定使用引物（表1）与25 μL反应体系，PCR反应程序为94℃预变性 5 min；94℃变性 40 s，36℃复性 40 s，72℃延伸1 min，共计40个循环；最后72℃延伸7 min。引物浓度为10 μM。随机引物由华大基因合成，利用随机引物对各样品基因组DNA进行扩增，凝胶电泳检测扩增产物。……