杨 洋， 王世祥， 房敏峰， 杨凌鉴， 孟 雪，2， 郑晓晖，2*

(1.西北大学生命科学学院，陕西西安710069;2.深圳清华大学研究院，广东深圳518057)

芳香开窍药物苏合香、安息香、石菖蒲性味辛，入心经，辛香走窜、芳香开窍，提高血脑屏障通透性。苏合香、安息香对D-氨基半乳糖敏化小鼠内毒素致死性攻击具有保护作用［1］，明显延长急性缺氧损伤小鼠的存活时间［2］。石菖蒲具有神经细胞保护和益智健脑作用［3］，能促进羟基红花黄色素A、葛根素、川芎嗪进入脑组织内［4］。苏合香、安息香、石菖蒲均可明显升高正常小鼠脑组织中伊文思蓝含有量［4-5］。但芳香开窍药物开放血脑屏障是否与P-gp外排功能有关，报道较少［5-6］。本研究采用P-gp高表达Caco-2细胞，对苏合香、安息香和石菖蒲有效成分安息香醛、香草醛和β-细辛醚与P-gp外排功能关系进行研究，为揭示苏合香、安息香和石菖蒲开窍醒脑作用机制提供实验依据。

1 材料

1.1 细胞 Caco-2细胞株购自中国科学院上海细胞库。

1.2 药品与试剂 安息香醛、香草醛、β-细辛醚、罗丹明-123(Rho-123)、四甲基偶氮唑盐 (MTT)、二甲基亚砜(DMSO)、维拉帕米 (Ver)(美国Sigma-Aldrich公司);DMEM培养基、胎牛血清、0.1%胰蛋白酶和磷酸盐缓冲液(美国GIBCO公司);T25细胞培养瓶、24，96孔细胞培养板 (美国Corning公司);色谱纯乙腈 (美国Fisher公司);实验用水为超纯水 (自制);其他试剂均为分析纯。

1.3 仪器 CB150型CO2培养箱 (德国 Binder公司);TE2000—U倒置相差显微镜 (日本 Nikon公司);TDL—40B型低温高速离心机 (上海安亭科学仪器厂);高效液相系统为Agilent 1100系列高效液相色谱仪，包括脱气机，二元梯度泵，自动进样器，柱温箱，荧光检测器 (美国Agilent公司);BP221S电子天平 (德国Sartorius公司)。……