周 清，侯 峰，董 斌，周海莉，甘 蓉

（1.辽宁省朝阳市药品检验所，朝阳122000；2.辽宁省食品药品检验所检验二室，沈阳110023；3.辽宁省大连市食品药品检验所抗生素室，大连116000；4.辽宁玉皇生化药品有限公司质量保证部，沈阳110102）

山茱萸为山茱萸科植物山茱萸Cornus offcinalis Sieb.et Zucc.的干燥成熟果肉，性微温，味酸、涩，归肝、肾经，具有补肝益肾、涩精固脱之功效，临床用于治疗眩晕耳鸣、腰膝酸痛、阳痿遗精、遗尿、尿频、崩漏带下、大汗虚脱、内热消渴等症［1］。山茱萸中所含成分较复杂，包括有机酸类、糖类、环烯醚萜类和鞣质类化合物。目前对于山茱萸药材的含量测定主要是以HPLC法测定熊果酸［2，3］和马钱苷［4］，但其分析时间长，分离效果差。超高速液相色谱（ultra fast liquid chromatography，UFLC）仪是日本岛津公司近几年推出的新型液相色谱仪，通过采用更小颗粒、更大峰容量的色谱柱，使得分析时间大为缩短，可以有效节省溶剂量，一般可节约80%的分析时间［5］。本研究采用UFLC法同时测定山茱萸中的马钱苷和莫诺苷。

1 仪器和试药

1.1 仪器 LC－20A型UFLC仪、LC Solution色谱工作站和XR－ODS色谱柱（日本岛津公司）；AG285型分析天平（梅特勒－托利多仪器上海有限公司）。

1.2 药品和试剂 马钱苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号111640－200503）；莫诺苷对照品（上海源叶生物科技有限公司，批号YY90349）；乙腈、甲醇（色谱纯，美国Tedia公司）；水为二次蒸馏水（辽宁省食品药品检验所自制）；其余试剂均为分析纯。20批山茱萸样品（辽宁玉皇生化药品有限公司提供），经辽宁省食品药品检验所王维宁副教授鉴定，均为山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb.et Zucc.的干燥成熟果肉。

2 方法和结果

2.1 色谱条件 色谱柱：XR－ODS柱（75mm×3.0mm，2.1μm）；流动相：乙腈－水（15∶85）；流速：1.0ml／min；柱温：45℃；检测波长：240nm。理论塔板数按马钱苷峰计算≥3 000，色谱峰的分离度符合要求，3min内检测完毕。

2.2 溶液的制备 （1）对照品溶液：取马钱苷对照品和莫诺苷对照品适量，精密称定，置于同一25ml量瓶中，加80%甲醇适量使溶解，稀释至刻度，得对照品溶液Ⅰ，其中马钱苷和莫诺苷的浓度分别为0.411 2和0.402 0mg／ml。精密吸取对照品溶液Ⅰ5.0ml置50ml量瓶中，加80%甲醇稀释至刻度，得对照品溶液Ⅱ，其中马钱苷和莫诺苷的浓度分别为

41.12 和40.20μg／ml。（2）供试品溶液：取山茱萸药材研磨成细粉，过四号筛。取药粉约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇25ml，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过。取续滤液，即得供试品溶液。取对照品溶液Ⅱ和供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，得到色谱图，见图1。

图1 莫诺苷和马钱苷的超高速液相色谱图

2.3 标准曲线的制备 分别精密吸取对照品溶液Ⅱ1、2、5、10μl和对照品溶液Ⅰ2、5μl，分别注入UFLC仪中，测定色谱峰面积（Y），以Y对进样量（X）做线性回归，得到马钱苷和莫诺苷的标准曲线方程分别为：Y＝3.282×105X＋3.020× 103和Y＝4.131×105X＋2.787×103，线性范围分别是0.041～2.056μg和0.040～2.01μg，线性关系良好（r＝0.999 9）。

2.4 稳定性实验 精密吸取同一批供试品溶液10μl，分别在配制后0、1、2、3、4、6h进样测定，结果测得马钱苷和莫诺苷峰面积的RSD分别为0.28%和0.14%（n＝6），表明供试品溶液配制后在室温放置6h内稳定。

2.5 精密度实验 精密吸取同一批供试品溶液10μl，连续进样6次测定，结果测得马钱苷和莫诺苷峰面积的RSD分别为1.20%和0.42%（n＝6），表明精密度良好。

2.6 重复性实验 取同一批山茱萸样品研磨成细粉，取约0.1g，精密称定，共取6份。按2.2项下方法制备成供试品溶液，按2.1项下色谱条件分别进样10μl。结果测得马钱苷和莫诺苷含量的RSD分别为1.02%和0.62%（n＝6），表明重复性良好。

2.7 回收率实验 取山茱萸药材，研磨成细粉过四号筛。取约0.05g，精密称定，共取6份，分别加入对照品溶液Ⅰ1.0ml，按2.2项下方法制备成供试品溶液。按2.1项下色谱条件分别进样10μl。结果测得马钱苷和莫诺苷的平均加样回收率分别为（98.0±1.02）%（n＝6）和（99.7±0.36）%（n＝6），表明回收率良好。

2.8 样品含量测定 取20批山茱萸药材，每批次进行两次平行操作，按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样分析，测定结果为两次测定值的平均值，见表1。

表1 山茱萸药材中马钱苷和莫诺苷的含量测定结果（%）

3 讨 论

现有文献多采用HPLC法测定山茱萸中马钱苷和熊果酸的含量，分析时间长。本研究采用UFLC法同时测定山茱萸中马钱苷和莫诺苷的含量，与传统的HPLC法相比，可以实现快速分离，在3min内完成分析，缩短分析时间，节约分析溶剂，有利于健康和环保。UFLC所用色谱柱比传统ODS色谱柱粒径更小，分离机制与传统色谱柱不同，导致山茱萸各成分出峰顺序与传统方法不一样。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典.2010年版一部［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：26.

State Pharmacopoeia Committee.Pharmacopoeia of the People’s Republic of China.2010ed.Volume 1［S］.Beijing：Chinese Medical Science Press，2010：26.In Chinese.

［2］ 王晓红.山茱萸几种不同炮制品的熊果酸含量测定［J］.中成药，2000，22（7）：482－483.

Wang XiaoHong.Quantitative analysis of ursolic acid from different prepared products of Fructus Corni［J］.Chin Tradit Pat Med，2000，22（7）：482－483.In Chinese with English abstract.

［3］ 宋良科，鄢 丹，马云桐.HPLC法测定山茱萸果实不同部位中熊果酸含量［J］.中药材，2004，27（8）：584－585.

Song LiangKe，Yan Dan，Ma YunTong.Content determination of ursolic acid in different parts of Corni Fructus by HPLC method［J］.J Chin Mat Med，2004，27（8）：584－585.In Chinese.

［4］ 王晓燕.不同采收期山茱萸中马钱苷的含量测定［J］.中国卫生检验杂志，2009，19（9）：2025－2026.

Wang XiaoYan.Determination of loganin in fruit of Cornus officinalis from different harvesting time［J］.Chin J Health Lab Technol，2009，19（9）：2025－2026.In Chinese with English abstract.

［5］ 施 法，侯 峰.金银花中3种成分含量的超高速液相色谱法同时测定［J］.时珍国医国药，2010，21（11）：3014－3015.

Shi Fa，Hou Feng.Simultaneous determination of 3ingredients contents in Jinyinhua by ultra fast liquid chromatography［J］.Lishizhen Med Mat Med Res，2010，21（11）：3014－3015.In Chinese.