王国富，高 峰，吴利先

幽门螺杆菌重组Bb－hpaA－vacA疫苗的构建＊

王国富，高 峰，吴利先

目的构建幽门螺杆菌（Hp）重组双歧杆菌（Bb）Bb－hpa A－vac A疫苗。方法通过PCR分别扩增hpa A和vac A抗原编码基因，然后采用基因拼接法（gene SOEing）剪接hpa A和vac A，得到hpa A－vac A融合基因；将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌－双歧杆菌穿梭表达载体pGEX－1λT，构建重组质粒pGEX－hpaA－vac A，电穿孔法将该质粒导入Bb，构建幽门螺杆菌重组hpa A－vac A疫苗，然后用SDS－PAGE和Western blotting鉴定表达的重组蛋白。结果PCR成功扩增出分子量约为1 500 bp的hpaA－vac A融合基因，双酶切证实hpa A－vac A融合基因成功插入pGEX－1λT中，并成功转化入双歧杆菌，而且重组蛋白能在双岐杆菌中得到正确表达，Western blotting显示重组蛋白具有免疫原性。结论成功构建螺杆菌rBbhpa A－vac A疫苗，为该疫苗的进一步研究奠定了基础。

幽门螺杆菌；双歧杆菌；重组hpaA－vac A疫苗；构建

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）能够引起慢性、活动性胃炎和消化性溃疡，同时它也是胃肿瘤的危险因素，并已被世界卫生组织列为胃癌等肿瘤发生的相关致病菌［1－2］。Hp在我国普通人群的感染率约为50%～80%，并仍以每年1%～2%速度增加［3］。如何根治Hp的感染一直是微生物学和消化疾病领域研究的热点。Hp在胃内定植的关键环节是粘附，是感染的先决条件和致病的关键。Hp粘附素基因hpa A（Helicobacter pylori adhesin A，hpa A）较保守，为Hp所特有，其编码蛋白Hpa A具有粘膜结合特性，并有良好的抗原性和免疫原性［4］。空泡毒素（Vacuolating cytotoxin A，Vac A）可诱导胃上皮细胞发生凋亡，凋亡在Hp致病过程中起着重要作用。而且Vac A在菌株中的表达率与临床发病率非常相符［5］，因此Vac A预防措施显得尤为重要。

双歧杆菌（Bifidobacterium bifidum，Bb）是一种常见的益生菌，近年来除对双歧菌的益生功能进一步深入研究外，利用该菌作为基因工程受体菌的研究也越来越受重视。……