蔡 亮，张 红，高立冬，刘运芝，胡世雄，刘富强，曾 舸，刘佳惠，李俊华

汉坦病毒M、S基因分型及种系进化分析＊

蔡 亮，张 红，高立冬，刘运芝，胡世雄，刘富强，曾 舸，刘佳惠，李俊华

目的探讨湖南省肾综合征出血热（HFRS）患者及宿主动物黑线姬鼠携带汉坦病毒的基因型别及序列特征。方法应用免疫荧光试验（IFA）对鼠肺标本进行粗筛，提取IFA阳性鼠肺组织及HFRS患者血清总RNA，设计汉坦病毒M、S基因特异性引物，应用RT－PCR技术进行扩增，回收阳性扩增产物并克隆到p MD－18 T载体进行序列测定，将所测序列与国内外HTNV及SEOV病毒株序列进行核苷酸同源性分析，应用MEGA5．0．4软件构建M、S基因种系进化树。结果IFA阳性鼠肺标本荧光显微镜下可见散在的黄绿色针尖大小样颗粒；RT－PCR法扩增汉坦病毒M、S基因，HTNV通用引物可见490 bp与593 bp的阳性条带；阳性产物进一步应用HTNV分型引物进行M、S基因检测，分别扩增出一约242 bp与276 bp大小的条带；SEO型特异性M、S基因片段内侧引物扩增反应均为阴性；编号为Hunan01、Hunan02、Hunan03的M、S基因序列与HTNV型84FLi株、SN7株的同源性最高，与SEOV型Gou3株的同源性最低；种系进化分析表明，Hunan01、Hunan02、Hunan03为汉坦病毒H5亚型。结论湖南省存在HTNV型感染病例与宿主动物，基因分型技术能进一步对病毒亚型进行鉴定。

肾综合征出血热；汉坦病毒；M基因；S基因；分型；种系进化

汉坦病毒（Hantavirus，HV）属于布尼亚病毒科（Bunyaviridae）汉坦病毒属，编码L、M、S 3个基因片段［1］，目前至少可以分为30个血清型／基因型，一些新的HV属病毒还在不断的发现中，主要引起肾综合征出血热（HFRS）和汉坦病毒肺综合征（HPS），基因组内极易发生变异，全球约90%以上的 HFRS 病 例 发 生 在 中 国［2－4］。……