裴晋红，柴文林，郭改娥，曹燕飞，汪军梅，栗学清

(1.长治医学院 生物化学教研室，山西 长治 046000;2.长治医学院 附属和济医院，山西 长治 046011)

p73是p53家族中第一个新成员，由Kaghad等于1997年首先发现，其染色体定位为1p36.2-3区。p73基因编码的蛋白质无论在结构上还是在功能上均与p53蛋白相似，且与肿瘤的发生密切相关。与p53基因不同的是，p73基因在人类大多数肿瘤中很少突变。目前许多资料表明，p73基因在许多肿瘤中均因异常甲基化而失活。本实验旨在探讨5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine)对非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkin's lymphoma，NHL)p73基因甲基化的逆转作用，从而为该疾病的治疗提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 试剂及仪器

Taq DNA聚合酶、λDNA HindⅢ Marker购自大连宝生物工程有限公司(TaKaRa);MMLV逆转录酶、RNA酶抑制剂、无 RNA酶的 DNaseⅠ购自Roche公司;100 bp DNA ladder Marker购自MBI公司;一抗:p73兔抗人单抗、β-actin小鼠抗人单抗以及二抗:山羊抗小鼠IgG、山羊抗兔IgG均购自Santa Cruz公司。

DNA回收纯化试剂盒(Wizard Clean-up System)购自Promega;DNA提取试剂盒购自Gentra公司。

所用引物均由广州Invitrogen公司合成。

PCR仪，英国Tech gene公司;凝胶扫描成像系统，美国Syngene公司。

1.2 研究对象

24例NHL标本，年龄在22～58岁之间，平均年龄为40岁，其中男性15例，女性9例。12例反应性增生淋巴结样本，年龄为15～48岁，平均年龄为31.5岁，其中男性8例，女性4例。以上样本均采自湖南省肿瘤医院。22例正常人外周血样本，男性10例，女性12例，采自中南大学湘雅三医院。

1.3 p73基因启动子的甲基化分析

用液氮研磨淋巴结组织，提取DNA，亚硫酸氢盐处理DNA后，再用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测p73基因外显子1的甲基化状况。甲基化产物的特异引物序列为:上游5'-GGA CGT AGC GAA ATC GGG GTT C-3';下游 5'-CGT CGC AAC CCC GAA CAT CG-3'。扩增片段大小67 bp。……