蔡 郁 蔡 敏 王文华 张步勇 徐艳萍 (吉林大学第二医院耳鼻咽喉头颈外科，吉林 长春 130041)

喉癌是我国北方地区常见的恶性肿瘤，发病率占头颈肿瘤的15%～20%，由于其发病部位受生理解剖特点的影响，手术很难彻底切除病灶，因此，非手术的综合治疗近年来倍受关注。热疗作为治疗手段之一，因其毒副作用反应低，与放疗、化疗等有协同作用，不仅用于无法手术切除的肿瘤患者，而且还可以用于肿瘤切除术中或术后治疗微小转移灶〔1〕。

1 材料与方法

1.1 细胞及试剂 Hep -2细胞株由吉林省肿瘤研究所惠赠，噻唑蓝(MTT)试剂及RPMI1640培养基购于美国sigma公司，胎牛血清购于长春生物制品研究所，5-氟尿嘧啶(5-FU)广州振康医药有限公司生产。

1.2 MTT比色法 取对数生长期的人喉癌细胞株Hep-2细胞，调细胞数为2×105/ml，接种于96孔塑料培养板内，每孔100 μl，当细胞增殖达到80%汇合时分组。单纯热疗组43℃ ±0.2℃持续加热40 min，然后移入37℃ 5%CO2培养箱内静止培养;单纯5-FU组，根据预实验结果，5-FU最适浓度200 μg/ml。联合组在单纯5-FU组基础上再加热40 min，然后移入37℃CO2培养箱静止培养24 h，于结束前6 h加入MTT试剂20 μl/孔，终浓度为500 mg/L，继续培养6 h后，吸弃上清，加入二甲基亚砜150 μl/孔，震荡10 min，用酶标仪于570 nm处测量各孔吸光度A值，按下列公式计算Hep-2细胞增殖抑制率，Hep-2细胞抑制率=(1－加药孔细胞A值÷对照孔细胞A值)×100%。

1.3 流式细胞术 细胞培养及分组同1.2，不同之处是将96孔板改为25 ml培养瓶，培养结束后细胞经0.25%胰蛋白酶消化，收集细胞。磷酸盐缓冲液(PBS)洗2次，70%冷乙醇固定，上机前过40目网调细胞数1×106/ml，碘化丙啶(PI)染色，流式细胞仪检测，以Modifi2.0软件分析细胞周期。……