王来栓 张金萍 吴冰冰 蒋思远 张 蓉 夏 庆

大量临床和实验研究表明宫内感染或炎症反应不仅是导致早产的原因，同时也是导致新生儿死亡和严重伤残的重要原因[1,2]。由于少突胶质细胞(OL)是早产儿脑室周围白质软化(PVL)发生的靶细胞和导致脑瘫发生的直接原因，对其发育、分布、增殖、分化和受损特点已有了较清楚的认识。 OL具有成熟度依赖“选择性”易损的特点：PVL发病“窗口期(孕23～32周)”的OL高度易损，而发育早期OL和成熟OL却不易受损[3]，并且发现OL自身抗氧化能力不足是造成对促炎细胞因子、氧自由基和兴奋性氨基酸等易损性的内在机制。促炎细胞因子和氧自由基主要由活化的小胶质细胞(MG)释放，而对MG的正常分化发育和活化后与少突胶质细胞前体细胞(OPCs)在PVL中的作用研究还非常有限。本研究假设MG的发育分布与OL细胞平行是早产儿脑白质损伤的关键所在。为此，通过分析不同孕龄C57B/L胎鼠MG、OL和神经元发育相关性，并通过脂多糖(LPS)宫内感染模型证实上述假设。

1 方法

1.1 实验动物 C57B/L孕小鼠购自中国科学院上海实验动物中心，SPF环境下饲养,雌雄鼠按2∶1配对,各分为8笼交配繁殖。

1.2 MG发育分析 取C57B/L胎龄10、15 d孕鼠，出生后0、5、10 d 新生鼠各6只，予水合氯醛350 mg·kg-1腹腔注射麻醉后沿升主动脉依次灌入生理盐水和4%多聚甲醛(pH 7.4)，取出脑组织后固定于4%多聚甲醛中过夜，依次置于20%、30%蔗糖溶液中至组织块下沉。脑组织块在-20℃的恒冷切片机上行30 μm的连续冠状切片。Tomato lectin作为静止期MG的特殊抗体进行染色，O4+作为OPCs抗体以浮片法进行免疫组化染色。……