徐 飞，迟富丽，谈 华，刘雪梅，曹 彤，潘 伟，钟天鹰

(南京医科大学 附属南京儿童医院检验科，江苏 南京 210008)

48株儿童侵袭性肺炎链球菌血清型分布

徐 飞，迟富丽，谈 华，刘雪梅，曹 彤，潘 伟，钟天鹰

(南京医科大学 附属南京儿童医院检验科，江苏 南京 210008)

目的 了解南京地区临床分离的侵袭性肺炎链球菌血清型分布情况。方法 用荚膜肿胀实结果检测2007年1月-2010年12月临床分离的48株侵袭性肺炎链球菌的血清型别。结果 48株侵袭性肺炎链球菌常见的血清型别为19F(27．1%)、19A(22．8%)、14(18．7%)和 9v(8．3%)，有 2 株用丹麦抗血清无法确定血清型。结论南京地区儿童临床分离的侵袭性肺炎链球菌的常见血清型为19F、19A、14和9v，与其它地区报道有一定差别。

侵袭性肺炎链球菌;血清型;分布;儿童

肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)是社区获得性肺炎的主要致病菌之一［1］。肺炎链球菌还可引起胸膜炎、脑膜炎、败血症等侵袭性肺炎球菌病(IPD)。2005年，世界卫生组织(WHO)估计全球每年约有160万人死于肺炎链球菌感染，尤其是IPD，其中70万～100万为5岁以下儿童，其中多数生活在发展中国家［2］。

肺炎链球菌能否致病与荚膜有密切关系。根据荚膜多糖的抗原特性，已经发现肺炎链球菌可分为46个血清群，90个血清型。在全球范围内，80%以上的IPD仅与20余种血清型有关。肺炎链球菌血清型构成随地域、年龄层次和时间会不断的变迁，因此需要不断进行监测。目前国内尚缺乏是南京地区有关肺炎链球菌特别是引起IPD的肺炎链球菌的血清型分布情况的数据，为了了解本地区引起IPD的肺炎链球菌的血清型分布，给预防肺炎链球菌及其造成的疾病和临床用药等提供更多资料，我们收集了2007年1月-2010年12月48株引起IPD的肺炎链球菌，对其血清型分布进行研究。

1 材料

1．1 菌株来源

分离自2007年1月-2010年12月临床侵袭性肺炎链球菌感染标本(血液、脑脊液、胸腹水及眼耳分泌物等)的肺炎链球菌48株。

1．2 主要试剂

肺炎链球菌培养基:Columbia基础培养基CM0331(英国Oxoid公司)+5%脱纤维羊血;奥普托辛(Optochin)试验(5 μg/片)纸片(英国 Oxoid公司);荚膜肿胀试验(Quellung试验)用荚膜特异性抗血清(丹麦Statens Serum Institute)。

2 方法

2．1 肺炎链球菌初步鉴定

2．1．1 胆汁溶菌试验 取适量菌液，调pH值为弱碱性，加入10%去氧胆酸钠，置于37℃，在15 min内出现细菌溶解，培养液变清者为阳性。同时用加入生理盐水的培养液作对照。

2．1．2 Optochin试验 方法类似药敏试验。待试菌涂布于血平板表面，再将含有一定量的Optochin滤纸片贴于平板涂菌处。于37℃ CO2培养24 h后观察抑菌圈的大小，肺炎链球菌抑菌圈的直径＞14 mm，甲型溶血性链球菌＜14 mm。

2．2 肺炎链球菌分型荚膜肿胀试验

采用荚膜肿胀试验，严格按产品说明操作，油镜下如荚膜显著肿大，菌体周围有一无色而较宽的环状物时，判断为荚膜肿胀试验阳性。

3 结果

48株侵袭性肺炎链球菌共涉及8个血清型(群)，主要分布在19F、19A、14、9v、23F、6B、7F 和 8血清型(群)，其中 19F和 19A最多见，分别占27．1%和22．8%，8 最少占 2．1%，尚有 2 株用本实验方法未能进行血清分型，占4．2%，见表1。

表1 48株肺炎链球菌血清学鉴定结果

PCV7(包含血清型 4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1和5)覆盖率为 62．5%，PCV11(包含血清型4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、5、3 和 7F)的覆盖率达到 75%，而 PCVl3(包含血清型 4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、5、3、7F、6A 和 19A)由于覆盖了19A、7F，其覆盖率显著提高，高达87．5%。

4 讨论

肺炎链球菌是引起肺炎、婴幼儿急性化脓性中耳炎和细菌性脑膜炎的重要病原菌。近年来肺炎链球菌耐药菌株及耐药菌型迅猛增加，使临床治疗更加棘手。为了解肺炎链球菌菌型分布情况，许多国家和地区开展了肺炎链球菌特别是侵袭性肺炎链球菌的血清型监测。监测显示，世界范围内90%以上的侵袭性感染是由16种左右的肺炎链球菌血清型引起［3-4］，常见的血清型有 19F、23F、19A、6B、14、6A等。血清型随着时间会不断的变迁，美国1998-1999年，19A型仅占IPD的2．5%，2005年达到36%，仅次于19F位居第二。

姚开虎等［5］报道2006-2007年北京、上海、广州和深圳4家儿童医院279株肺炎链球菌以19F最常见(60．6%)、其次为 19A(9．7%)、23F(9．3%)和6B(5．4%)，上述4种血清型占全部菌株的84．9%。刘春林等［6］报道全国15个地区148株来自血液、脑脊液等侵袭性感染部位的肺炎链球菌清分型主要集中在19A、19F、3、23F、5、6、14 和 9 血清型(群)，以19A(22．3%)、19F(16．9%)最常见，其次为 3 群(7．4%)和23F(6．8%)。本次研究48株侵袭性肺炎链球菌血清分型中，以19F比例最高(27．1%)、其次是19A(22．8%)、14(18．7%)、9v(8．3%)、6b(6．3%)、23F(6．3%)，以 19F 和 19A 最常见，这和国内外报道基本一致。不同的是本次研究中14血清型占18．7%，比例明显比文献［5-6］报道的要高，这可能与肺炎链球菌存在地区差异有关。和国内外其他地区的报道相类似的是，非疫苗覆盖血清型(NVT)如19A、7F、8的比例升高了，其中19A所占比例高达22．8%。发生血清型变化的机制尚不明确，可能是由于结合疫苗血清型仅为7种血清型，推广使用PCV7对肺炎链球菌的生存具有选择性压力，有利于NVT的传播流行;本研究中PCV7覆盖率只有62．5%，PCV11的覆盖率为75%，而PCV13由于覆盖了19A、7F，其覆盖率显著提高，高达87．5%。但也有监测结果提示19A型增加可能不是PCV7应用的结果，而与抗生素选择压力有关。本研究中PCV7覆盖率为62．5%，PCV11的覆盖率为75%，而PCV13由于覆盖了19A、7F，其覆盖率显著提高，高达87．5%。南京地区儿童感染侵袭性肺炎链球菌血清型分布中19A型在IPD中占据重要位置，因此本地区儿童在接种肺炎链球菌疫苗，PCV13应为首选，肺炎链球菌监测是一个长期的过程，我们应密切监测肺炎链球菌特别是侵袭性肺炎链球菌血清型的变化，以便及时准确地评价疫苗的预防效果。

［1］ Taylor S N，Sanders C V．Unusual manifestations of invasive pneumo-coccal infection［J］．Am J Med，1999，107:12S-27S．

［2］ World Health Organization．Pneumococcal conjugated vaccine for childhood immunization-WHO position paper［J］．Wkly Epidemiol Rec，2007，82(12):93-104．

［3］ Garcfa-Suarez M M，Villaverde R，Caldevilla A F，et a1．Serotype distribution and antimicrobial resistance of invasive andnon-invasive pneumococccal isolates in Asturias，Spain［J］．Jpn J Infect Dis，2006，59:299-305．

［4］ Denham B C，Clarke S C．Serotype incidence and antibioticsusceptibility of Streptococcus pneumoniae causing invasive diseasein Scotland，1999-2002［J］．J Med Microbiol，2005，54:327-331．

［5］ 姚开虎，王立波，赵根明．北京上海广州深圳4家儿童医院肺炎住院患儿肺炎链球菌分离株的血清型分布［J］．中国循证儿科杂志，2006，44:928-932．

［6］ 刘春林，赵春江，刘昱东，等．侵袭性肺炎链球菌148株血清型、耐药性及分子分型研究［J］．中华医学杂志，2010，90(22):1565-1570．

Study on serotype distribution in 48 isolates of invasive Streptococcus pneumoniae with which children infected

XU Fei，CHI Fu-li，TAN Hua，LIU Xue-mei，CAO Tong，PAN Wei，ZHONG Tian-ying
(Department of Clinical Laboratory，the Children's Hospital Affiliated to Nanjing Medical University，Nanjing 210008，China)

Purpose To investigate serotype distribution of invasive Streptococcus pneumoniae of clinical isolates in Nanjin．Methods A total of 48 strains invasive Streptococcus pneumoniae were collected from January 2007 to December 2010．Serotyping of Streptococcus pneumoniae was performed by using quelling reaction．Results The most common serotypes 48 Streptococcus pneumoniae isolates were 19F(27．1%)、19A(22．8%)、14(18．7%)and 9v(8．3%)．There were two strains(4．2%)that cannot be identified with the antisera used．Conclusion The major serotypes of invasive Streptococcus pneumoniae with which children infected in Nanjing are 19F，19A，14 and 9v．

Streptococcus pneumoniae;serotypes;distribution;children

R446．5

A

1005-1678(2012)06-0909-02

2012-07-20

徐 飞，男，病原生物学硕士，主管技师，主要从事临床微生物工作，E-mail:feixu1975@126．com。