马 晶,赵国强,朱 含,袁建党,章 茜#,安玉会

1)郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州 450001 2)郑州大学基础医学院生理学教研室郑州 450001 3)郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室郑州 450001

#通讯作者,女,1957年 10月生,博士,教授,研究方向:心律失常的分子机制,E-mail:qianzhang@zzu.edu.cn

酵母双杂交系统检测 SK2与 RyR2蛋白的相互作用＊

马 晶1),赵国强1),朱 含2),袁建党2),章 茜2)#,安玉会3)

1)郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州 450001 2)郑州大学基础医学院生理学教研室郑州 450001 3)郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室郑州 450001

#通讯作者,女,1957年 10月生,博士,教授,研究方向:心律失常的分子机制,E-mail:qianzhang@zzu.edu.cn

小电导 Ca2+激活 K+通道;肌浆网;酵母双杂交;相互作用

目的:探讨小电导 Ca2+激活 K+(SK)通道亚型 SK2通道与肌浆网 (RyR)2蛋白的相互作用。方法:经PCR扩增及酶切鉴定,构建含有 SK2和 RyR2目的基因片段的酵母表达载体 pGBKT7-SK2和 pGADT7-RyR2。pGBKT7-SK2与 pGADT7-RyR2经电转化法转化酵母宿主 AH109,X-α-Gal/3AT/SD/-Trp-Leu培养鉴定阳性克隆。结果:获得 3个重组质粒 pGBKT7-SK2和 16个重组子 pGADT7-RyR2。酵母双杂交检测结果显示 pGBKT7-SK2与pGADT7-RyR2可转化酵母AH109,但无阳性菌落生长。结论:SK2和 RyR2蛋白之间可能无直接相互作用。

小电导 Ca2+激活 K+(small-conductance calcium-activated potassium channel,SK)通道有 4种不同的亚型,分别为 SK1、SK2、SK3和 SK4通道[1]。人和小鼠的心肌组织存在 SK2通道,参与心肌细胞动作电位 (action potential,AP)复极化的构成[2-3]。SK通道是依赖于细胞内 Ca2+激活的 K+通道,其钙源主要来自细胞膜 L-Ca2+通道,部分可能与肌浆网(ryanodine receptor,RyR),即 Ca2+释放通道有关[4]。作者之前的工作首次验证了心肌 SK2通道与 RyR2(心脏 RyR型受体)为一功能复合体,具有相互作用[3]。为进一步探讨 SK2的功能,作者采用酵母双杂交系统检测了 SK2蛋白与 RyR2蛋白之间是否存在直接相互作用,报道如下。……